手性色譜柱(Chiral HPLC Columns)是由具有光學(xué)活性的單體,固定在硅膠或其它聚合物上制成手性固定相(Chiral Stationary Phases)。那么下面就跟著研創(chuàng)生物一起來(lái)看看手性色譜柱的五大常識(shí)吧!
1、色譜法
答:色譜法利用不同物質(zhì)在不同相態(tài)的選擇性分配,以流動(dòng)相對(duì)固定相中的混合物進(jìn)行洗脫,混合物中不同的物質(zhì)會(huì)以不同的速度沿固定相移動(dòng),最終達(dá)到分離的效果。常用的色譜檢測(cè)有高效液相色譜(HPLC)、超臨界色譜(SFC)、模擬移動(dòng)床(SMB)、氣相色譜(GC)、薄層色譜(TLC)等,可根據(jù)樣品特性選擇最合適的色譜檢測(cè)方法。
2、正相&反相
答:液相色譜有正相和反相之分。如果固定相的極性大于流動(dòng)相的極性,就稱為正相色譜;如果固定相的極性小于流動(dòng)相的極性,則稱為反相色譜。在正相色譜中,極性小的物質(zhì)先出峰,極性大的物質(zhì)后出峰;反相則相反。在大賽璐開(kāi)發(fā)的方法中,通常把以正己烷、醇、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、四氫呋喃等有機(jī)溶劑為流動(dòng)相的方法稱為正相方法;把以水(中性、酸性或堿性)和有機(jī)溶劑共同作為流動(dòng)相的方法稱為反相方法;把以100%的醇或乙腈做流動(dòng)相的方法稱為極性模式。
3、多糖衍生物手性固定相的手性拆分機(jī)理
答:在多糖衍生物手性固定相上進(jìn)行的拆分機(jī)理目前尚部完全清楚,基于Dalgliesh提出的“三點(diǎn)作用原理”,認(rèn)為在對(duì)映體和CSP之前可能存在π-π作用、偶極-偶極作用、氫鍵作用及非手性作用(如空間效應(yīng))等作用力,這些作用力的綜合結(jié)果將使兩個(gè)對(duì)映體與固定相之間形成非對(duì)映體絡(luò)合物的穩(wěn)定性有差異而得到分離,且差異性越大,實(shí)現(xiàn)分離的可能性越大。
4、評(píng)價(jià)柱性能的參數(shù)
答:評(píng)價(jià)一支柱子性能的參數(shù)通常有:色譜峰的保留時(shí)間、理論塔板數(shù)、拖尾因子和分離度等。大賽璐新柱出廠都嚴(yán)格地經(jīng)過(guò)QC測(cè)試,并附有檢測(cè)報(bào)告。這里需要提出的是,因?yàn)楸碛^參數(shù)不但與柱子本身性能有關(guān),與使用的儀器也有很大關(guān)系,不同儀器間的檢測(cè)結(jié)果會(huì)有差別。
5、手性柱的最大載樣量是多少?
答:手性柱的最大載樣量取決于柱子的尺寸、流動(dòng)相條件及樣品本身的性質(zhì)(溶解度等),因此很難給出一個(gè)明確的值。超出柱子的負(fù)載量(進(jìn)樣體積太大或樣品濃度過(guò)高)會(huì)使得峰展寬或峰融合。