導(dǎo)致液相色譜柱失效的常見(jiàn)問(wèn)題及解決辦法。
1篩板堵塞。
色譜柱入口篩板堵塞是最常見(jiàn)的問(wèn)題之一,會(huì)導(dǎo)致柱壓升高,色譜峰拖尾,塔板數(shù)降低等問(wèn)題,通常分析樣品中微粒雜質(zhì)最右可能堵塞色譜柱入口,因此分析時(shí),需要先過(guò)濾或者離心,乳濁或渾濁樣品應(yīng)以0.25μm濾膜處理,也可用針頭過(guò)濾器過(guò)濾,進(jìn)樣器與泵密封墊的磨損也會(huì)帶入微粒,色譜柱在進(jìn)樣閥與色譜柱之間使用0.25μm或0.45μm的在線(xiàn)過(guò)濾器,通??梢员苊膺@類(lèi)問(wèn)題。
2強(qiáng)保留樣品組分。
強(qiáng)吸附性的樣品組分吸附在柱頭填料上,能?chē)?yán)重地影響色譜柱壽命,像生物組織或體液的提取物,天然產(chǎn)物等復(fù)雜樣品,極易造成柱頭的污染,相對(duì)較純的樣品,一般不會(huì)出現(xiàn)這一問(wèn)題,色譜柱應(yīng)用中,色譜峰嚴(yán)重拖尾或分裂往往是強(qiáng)保留污染物在柱頭吸附的體現(xiàn)。
3色譜柱裝填不良。
裝填不良的色譜柱,在色譜柱短時(shí)間應(yīng)用后,填充床的壓縮通常使柱頭處產(chǎn)生塌陷,導(dǎo)致柱效突然降低,色譜柱的初始評(píng)價(jià)指標(biāo),如塔板數(shù),不對(duì)稱(chēng)因子等往往不能很好地表征色譜柱床層的穩(wěn)定性,這種情緒只能在實(shí)際應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)。
有些色譜柱(如凝膠柱)不允許氣泡進(jìn)入,否則會(huì)降低柱效,甚至形成難以去除的小氣室,因此,為了防止氣泡進(jìn)入柱,必須使用脫氣流動(dòng)相,并嚴(yán)格按照以下程序安裝柱:。
A.取下下色譜色譜柱柱入口的密封螺釘觀(guān)察是否有溶劑泄漏。
b.如果溶劑滲出則可以將色譜柱連接到管道上避免氣泡進(jìn)入。
C.如果沒(méi)有溶劑滲出,說(shuō)明空氣已經(jīng)進(jìn)入色譜柱的這一端,此時(shí),將色譜柱出口端與進(jìn)樣閥連接,用流動(dòng)相反方向沖洗色譜柱,以除去色譜柱中的空氣,優(yōu)選用0.2ml/min的小流量沖洗柱,這將導(dǎo)致柱性能的降低,如果溶劑的流速過(guò)快或壓力的突然增加將導(dǎo)致柱性能的降低。
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