高效液相色譜柱的正確使用包含:加裝保護(hù)柱,過濾流動相和樣品,凈化樣品,避免過高的柱壓,注意溫度和酸堿度,正確及時(shí)的沖洗等。
保護(hù)柱的作用是過濾掉來自流動相和樣品的化學(xué)“拉圾”同時(shí)也可以有效除去流動相和樣品中的不溶物,盡管現(xiàn)在的色譜儀在流動相吸入口,進(jìn)樣閥后部以及在色譜柱的兩端都裝有1,2μm等不同孔徑的濾器,但濾器只能除去不溶性顆粒而不能除去化學(xué)污染,因此,加裝保護(hù)柱是必要的,特別是在分析中藥色譜柱,中成藥等復(fù)雜混合物和生物樣品時(shí)更是保護(hù)分析柱必不可少的措施。
流動相通常由水或緩沖溶液與有機(jī)溶劑混合而成,原則上,所有經(jīng)過色譜柱的流動相均應(yīng)過濾,但在實(shí)際操作上應(yīng)視具體情況而有所區(qū)別:當(dāng)有機(jī)溶劑用色譜純級,水用石英亞沸水或其它超純水時(shí),在能確保水和有機(jī)溶劑的質(zhì)量且沒有受到污染時(shí),過濾并無更多實(shí)際意義。
當(dāng)樣品中含有對色譜柱有損害的化學(xué)成分,如產(chǎn)生永久性吸附的蛋白質(zhì),糖等有機(jī)分子和強(qiáng)吸附性物色譜柱質(zhì),以及可能對柱填料產(chǎn)生破壞作用的基團(tuán)離子,在進(jìn)樣前應(yīng)盡可能對樣品進(jìn)行分離提純以除去多余雜質(zhì)組分。
在液相色譜分析過程中,常常需要使用緩沖鹽來調(diào)解流動相的pH值,緩沖鹽的恰當(dāng)選擇能夠改善分離效果和峰形,若是對緩沖鹽選擇和使用不當(dāng),對色譜柱可能造成一些影響。
緩沖鹽使用不當(dāng)對色譜柱的影響及其正確使用方法。
我們可以從柱壓升高,柱效下降以及使化合物的保留時(shí)間發(fā)生變化等方面來分析原因:。
色譜柱(1)柱壓升高。
原因:緩沖鹽使用不當(dāng)導(dǎo)致緩沖鹽析出,會堵塞色譜柱兩端的塞板和鍵合相顆粒之間的孔隙,阻礙流動相傳質(zhì),從而引起柱壓升高。
?。?)柱效下降。
原因:a)有些緩沖鹽會滲入到鍵合相的深處,損害硅膠基體,導(dǎo)致色譜柱鍵合相流失,柱床變松,柱效下降,b)凝結(jié)在鍵合相表面,使C18碳鏈難以舒展,對物質(zhì)的保留能力下降,導(dǎo)致柱效下降,因此用過緩沖鹽后需要對色譜柱進(jìn)行沖洗,水中緩沖鹽濃度較大時(shí)應(yīng)特別引起注意。
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