C18柱的填料對色譜柱的影響：柱填料的物理性能對填料的色譜化行為有重要影響。填料的主要物理性能包括：顆粒度、孔徑、孔體積、鍵相化學、含碳量和烷基化處理。

（1）顆粒度是指柱狀填料的顆粒直徑。事實上，色譜柱上的顆粒直徑是一個平均值。例如，顆粒直徑5μm并非所有的顆粒直徑為5μm，但實際上它們具有顆粒分布度。這種分布度對柱的反壓力和柱效應(yīng)有重要作用。一般來說，顆粒越小，顆粒分布越小，色譜柱效應(yīng)越高，反壓力越高。目前，C18柱填料的粒徑在4~10μm之間。

（2）孔徑是指填充物顆粒之間的孔隙。一般孔徑是指填充材料的平均孔徑。球形填料柱體的平均孔徑較窄，柱體床結(jié)構(gòu)均勻，柱體效應(yīng)高，再現(xiàn)性好；無定型填料的平均孔徑分布較寬，柱體床結(jié)構(gòu)不均勻，流動相線速度不均勻，光譜帶寬。平均孔徑的大小對分離大分子化合物有很大的影響。當分離含有大分子的樣品時，可能會產(chǎn)生分子排放效應(yīng)，或產(chǎn)生吸附效應(yīng)，影響定量的回收率和準確性。因此，在使用反相光譜分離等蛋白質(zhì)或多肽樣品時，應(yīng)考慮選擇大孔徑（如30nm）的反相柱填料?？左w積作為硅膠多孔的參數(shù)，可作為大分子化合物分離分析的參考，選擇大孔體積的反相柱填料。

（3）在高效液相色譜法中，化學鍵合填充材料占有非常重要的地位。它可以使用極性較小的溶劑作為具有較大鍵合極性的流動相的有機基團。也可以選擇具有較小鍵合極性的有機基團作為流動相的極性溶劑。C18色譜柱存在于硅烷化鍵合（Si-O-Si-C）中。這種鍵合反應(yīng)目前最常用。例如，十八烷基三氯硅烷與全多孔硅膠M-Porasil-C18發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生烷基化學鍵合成，商品名為M-Bondak-C18。

（4）含碳量即填料中的含碳量。傳統(tǒng)的測定技術(shù)是將填料加熱至碳氫鍵斷裂，再通過測定丟失的重量或形成的二氧化碳來計算含碳量?？赏ㄟ^加大碳鍵的長度或加大碳鍵合密度來提高含碳量。含碳量提高，柱的預留值提高。與鍵合密度相關(guān)的色譜行為，也與硅膠的密度和填料的表面積相關(guān)，填料的密度越高，填料柱的所需硅膠含量越高，柱的含碳量也越高。如果填料柱的預留行為明顯不同，填料柱的含碳量相同，密度不同。因此，單獨預測含碳量的色譜行為是不夠的。

（5）C18硅烷化試劑是一種大于2nm的大分子，因此它會與相鄰硅醇基上的C18硅烷化試劑產(chǎn)生嚴重的立體阻力。因此，在某些色譜條件下，這些極性硅醇基與堿性化合物相互作用，從而影響峰形拖尾，從而導致大量殘留的硅醇基在硅膠表面與硅醇化試劑發(fā)生反應(yīng)，從而影響定量分析結(jié)果。通過烷基化學處理，這些問題可以在一定程度上得到解決。烷基化學處理是在鍵合相上完成的獨立反應(yīng)，以減少硅膠表面的硅醇基。烷基化學處理采用小分子子試劑（如三甲基硅烷），其空間位置阻力遠小于C18基團。大多數(shù)固定相只有30%的可覆蓋的鍵合位置。據(jù)報道，通過一些非?；钴S的化學試劑和特殊的反應(yīng)條件，最高的覆蓋率可以達到50%。很好地理解了解硅膠鍵合相的物理特性，這將有助于在高效液相色譜的反應(yīng)中選擇合適的色譜柱。盡管化學官能團表面上看起來相同，但實際上，不同品牌的C18柱的性能可能會有很大的差異，從而產(chǎn)生不同的分離結(jié)果。