影響手性色譜柱壽命的幾個因素主要包括:流動相、樣品等因素。在使用色譜柱時,應(yīng)注意這些因素,以有效地提高使用壽命。
一.流動相因素
1.流動相pH
不同基質(zhì)的填料有不同的pH適用范圍。常溫下不定形硅膠在純水中的溶解度約為100mg?L-1,且在pH1~9范圍內(nèi)溶解的硅膠量幾乎為常量??紤]到溶解速度的影響,硅膠基質(zhì)填料能承受的流動相pH范圍約為1~8。由于鍵合層的屏蔽作用,鍵合相硅膠填料大大提高了填料對流動相的適應(yīng)性。如今,廣泛使用的反相色譜填料C18(十八烷基硅烷鍵合硅膠)pH適用范圍可達2~10。當流動相時。pH當值超過酸性范圍時,鍵合容易水解流失;當流相相流動時,pH當超過堿范圍時,會加速硅膠的溶解,釋放絮狀物阻塞柱。這兩種反應(yīng)都是不可逆的,尤其是在高溫下(>40℃)在環(huán)境中,柱效會迅速降低并報廢。
2.流動相變質(zhì)
目前使用最廣泛的是硅基鍵合相填料。當溶液作為流動相或流動相中含有一定濃度的磷酸鹽緩沖液時,一些細菌或霉菌會在溶液或緩沖鹽溶液中生長,從而阻塞固定相顆粒之間的間隙。特別是對于多自動比例混合的高效液相色譜儀,由于儲存時間長,水相或緩沖鹽相容易單獨儲存。
3.流動相純度
目前廣泛使用的填料顆粒粒范圍為3~10μm,孔徑在6~10nm,色譜柱在使用過程中會有大量的流動相通過。如果流動相含有少量不溶性雜質(zhì)顆粒,很容易在柱頭位置被截流。從長遠來看,它會導(dǎo)致色譜柱反射阻塞,導(dǎo)致柱壓升高,無法正常使用。
4.其它因素
例如,流動相的極性也對柱有一定的影響,甲醇.水.極性物質(zhì)如冰醋酸會損壞硅膠填料柱、正丁醇等.二氯甲烷等極小物質(zhì)會損壞硅膠柱,堿性溶液會損壞陽離子交換樹脂色譜柱,酸性溶液容易損壞陰離子交換樹脂柱。
二.樣品因素
1.樣品溶解性
樣品樣品在準備過程中,如果少量顆粒未能完全溶解,則會與樣品一起進入色譜柱,也會沉積在柱頭,導(dǎo)致色譜柱堵塞。
2.樣品純度
樣品中可能含有待分析成分以外的各種成分或雜質(zhì),可能在柱內(nèi)產(chǎn)生不可逆吸附,從而覆蓋固定相的活性點,改變保留特性。
3.樣品的化學(xué)性質(zhì)
待檢測樣品中的各種成分與填料之間應(yīng)具有化學(xué)穩(wěn)定性。典型的是使用氨基鍵合柱時,應(yīng)避免使用含有堿的化合物和流動相,如甲苯.乙酸丁酯等,以防固定相中NH2和酐.酮發(fā)發(fā)希夫(Schiff)固定相因收縮而損壞。
三.影響手性色譜柱產(chǎn)品壽命的其他因素
手性色譜柱使用壽命的影響因素很多,除了流動相和樣品因素外,還有其他外部因素,如柱壓、溫度、色譜柱正確清洗、色譜柱正確安裝等。