一般反相液相色譜柱以乙烯醇共聚物為基質(zhì),即使碳含量高,也能保持表面濕潤。多孔結(jié)構(gòu)平均孔徑足夠大,對(duì)小分子化合物、多肽和小分子蛋白有理想的分離效果。
在有機(jī)溶劑比例較高的流動(dòng)相中,柱具有與硅膠基質(zhì)色譜柱相同的柱效應(yīng),但在堿性緩沖溶液為流動(dòng)相的情況下,其分離效率超過硅膠色譜柱。其中一個(gè)顯著的特點(diǎn)是基質(zhì)烷基填料的洗滌順序,其保留能力與碳鏈的長度成正比。
通用型反相液相色譜柱堵塞如何解決?
如果遇到堵塞,首先要確定堵塞是什么原因造成的。如果是色譜柱中殘留的緩沖鹽造成的,是輕微堵塞。你可以試著在高溫下用高比例的水沖洗色譜柱。
如果色譜柱因樣品原因堵塞,應(yīng)考慮另一種方法。如果樣品中吸附物質(zhì)過多(有時(shí)是復(fù)雜樣品中的一些雜質(zhì),不能通過過濾離心去除),可嘗試用不同的溶劑(溶解性好)慢慢沖洗。
如果樣品過濾不當(dāng)或樣品沉淀在色譜柱上導(dǎo)致一些顆粒雜質(zhì)堵塞色譜柱,除了試圖找到合適的溶劑沖洗,只能考慮反沖洗,一般不建議反沖洗色譜柱,因?yàn)榭赡軐?duì)色譜柱造成很大的損壞,所以反沖洗是死馬當(dāng)活馬醫(yī)生的最后手段,必須小心使用。做好樣品預(yù)處理,使用預(yù)柱或在線過濾器是保護(hù)色譜柱的好方法!