液相色譜保留時間總是飄忽不定,令人難以琢磨。根據(jù)經(jīng)驗,色譜保留時間不重現(xiàn)分為兩種情況:一是保留時間單方向的漂移,即保留時間提前或延后;二是保留時間無規(guī)律的波動,即保留時間忽前忽后。
介紹色譜保留時間漂移前,我們先來了解與區(qū)分保留時間、死時間、調(diào)整保留時間的概念:
保留時間(tR):從進樣開始到某個組分的色譜頂點的時間間隔稱為該組分的保留時間。即從進樣到柱后某組分出現(xiàn)濃度極大時的時間間隔。
死時間(t0):分配系數(shù)為0的組分的保留時間稱為死時間。通常將空氣或者甲烷視為此種組分,用來測定死時間。
調(diào)整保留時間(tR'):某組分由于溶解(或者吸附)于固定相,比不溶解(或者不吸附)的組分在柱中多停留的時間稱為調(diào)整保留時間。
調(diào)整保留時間=保留時間-死時間
※在實驗室條件下(溫度、固定相等)一定時,調(diào)整保留時間僅決定于組分的性質(zhì),因此調(diào)整保留時間是定性的基本參數(shù)。
那液相色譜中保留時間為何忽前忽后呢?下面我們來說說主要的影響因素及“破案”方法。
若發(fā)生保留時間漂移,需要考慮流動相是否已使色譜柱達到充分的平衡。一般情況下,流動相平衡色譜柱需要10-20個柱體積;但如果流動相中有使用弱酸、弱堿、緩沖鹽和離子對試劑,或者固定相為正相硅膠等,則需要更長的時間來平衡色譜柱。
這時也可能會導(dǎo)致保留時間的漂移,需要同時觀察色譜峰型、柱效、壓力的變化情況,推測色譜柱是否被污染??梢愿鶕?jù)具體的測試條件來選擇適當?shù)娜軇┻M行色譜柱的沖洗,或更換新的色譜柱。為了延長色譜柱的使用壽命,增加保護柱是非常有效的方法。
確認柱溫的準確性,柱溫的變化也會導(dǎo)致保留時間的變化。
流動相中某種試劑的揮發(fā),流動相中不同試劑的比例配制有誤,也會導(dǎo)致保留時間的變化,需要確認流動相是否新鮮與正確。
觀察柱前壓力,如果壓力不穩(wěn)定或者偏離正常值,可能是泵流速不準確或者有氣泡產(chǎn)生,出現(xiàn)保留時間的不穩(wěn)定,需要保證儀器流速的準確性與穩(wěn)定性。
觀察系統(tǒng)壓力,如果幾次進樣的壓力曲線不能重合或差別比較大,可能是系統(tǒng)存在泄露或堵塞,出現(xiàn)保留時間的不穩(wěn)定,需要依次排查系統(tǒng)中有無漏液或堵塞異常。
保持保留時間的重復(fù)性是重中之重!同時,也要盡可能避免保留時間的漂移!關(guān)注保留時間的穩(wěn)定性也能反映流動相、檢測器等的正常情況!