拖尾峰原因及解決方法
柱內(nèi)填料污染
色譜柱被堵塞
原因:色譜柱的進(jìn)出口的篩板堵塞,樣品進(jìn)入色譜柱時(shí)會受阻,液體流動(dòng)受阻形成延遲,使得樣品在相中停留時(shí)間變長,從而使峰型拖尾。
解決方法:
1.配置流動(dòng)相時(shí)污染流動(dòng)相使用色譜純?nèi)芤?,現(xiàn)配現(xiàn)用,并通過4.5um濾膜過濾后方可使用。
2.型號規(guī)格插口不匹配,在扭緊的時(shí)候造成形變而促使管道阻塞。色譜柱有物理損壞是會造成峰形拖尾。唯一的解決方法就是更換新柱。
3.樣品存在雜質(zhì),導(dǎo)致堵塞在篩板處,過濾樣品
4.應(yīng)用較高濃的緩存鹽溶液,在關(guān)機(jī)時(shí)將會在出入口端結(jié)晶體成塊并導(dǎo)致阻塞。
5.適當(dāng)降低溫度,讓試劑溶解得慢一些。
6.如以上方法都不能解決堵塞問題,則需考慮換一根新的手性色譜柱。
樣品濃度過高致使柱超載原因:樣品在柱上超載能引起峰展寬,拖尾(或伸舌)。解決方法:適當(dāng)減小進(jìn)樣量或樣品濃度(需要時(shí),可提高檢測器靈敏度)直至峰形和保留時(shí)間不再改變,便可消除這種不良影響。減小進(jìn)樣量還能改善其分離度。正常情況下,樣品中每種化合物在150×4.6mm柱中進(jìn)樣量保持在3~50ug范圍內(nèi),不會引起明顯超載。柱外效應(yīng)原因:柱外效應(yīng)(即進(jìn)樣閥、色譜柱及檢測器間的管路過長、直徑過粗、管路接頭不匹配、有死體積)是指色譜柱之外的造成色譜峰展寬的成因。解決方法:在可能的條件下,色譜柱要使用合理管長的管路,連接管內(nèi)徑盡可能窄小,切口務(wù)必平整光滑,同時(shí)流速需要合理不要過快,可采用色譜柱推薦的流速,以防止因樣品擴(kuò)散造成不能反映色譜柱真實(shí)柱效等情況發(fā)生。硅醇基團(tuán)作用原因:仔細(xì)分析色譜柱內(nèi)填料表面性質(zhì)可知:反相色譜柱填料的表面大約被鍵合相覆蓋了一半,其余的就是未被鍵合的硅醇基團(tuán)。所謂的保留是指樣品分子與鍵合相相互作用的結(jié)果。但是,酸性或堿性化合物與硅膠表面殘存的硅醇基團(tuán)或金屬雜質(zhì)之間相互作用而引起雙重保留機(jī)理,因此,發(fā)生了峰形拖尾。解決方法:為了減小峰形拖尾,通常可在流動(dòng)相加入25mM三乙胺(抑制劑)。三乙胺能與硅醇基團(tuán)發(fā)生強(qiáng)烈的相互作用,從而降低或阻斷樣品分子與硅醇基團(tuán)的作用,以保證保留機(jī)理正常進(jìn)行,并大大緩解了峰形拖尾。建議使用長鏈的硅醇基抑制劑,雖起效較慢,但持續(xù)力較三乙胺長。因?yàn)橐种苿┓肿又谐税坊c硅醇基團(tuán)發(fā)生極性作用外,大分子中非極性部分與固定相也會發(fā)生反相作用而產(chǎn)生保留現(xiàn)象。如果將抑制劑加至樣品中,效果會顯著。柱內(nèi)金屬污染原因:柱內(nèi)金屬污染(Fe,Ni等)可引起峰形拖尾。金屬可由填料本身帶進(jìn),也可由腐蝕性流動(dòng)相緩慢溶解柱進(jìn)口的金屬濾片,隨流動(dòng)相沉積到柱填料中。解決方法:若色譜柱內(nèi)填料被金屬污染后,造成酸/堿性樣品拖尾,可用堿洗/酸洗后再鍵合的填料。
樣品濃度過高致使柱超載
柱外效應(yīng)
硅醇基團(tuán)作用
柱內(nèi)金屬污染
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