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干貨 | HPLC峰型問題之拖尾峰的原因和解決方法

欄目：行業(yè)資訊 發(fā)布時(shí)間：2023-09-07
拖尾峰又叫后延峰，拖尾峰表現(xiàn)為前沿陡峭，后沿較前沿平緩的不對(duì)稱峰。
拖尾峰又叫后延峰，拖尾峰表現(xiàn)為前沿陡峭，后沿較前沿平緩的不對(duì)稱峰。

拖尾峰

拖尾峰原因及解決方法

拖尾峰主要由柱內(nèi)填料污染，色譜柱被堵塞，樣品濃度過高致使柱超載，柱外效應(yīng)，硅醇基團(tuán)作用等原因?qū)е?。小研邀?qǐng)了廣州研創(chuàng)的技術(shù)小哥為大家講解一下產(chǎn)生的原因以及解決的方法：



柱內(nèi)填料污染

  • 原因：流動(dòng)相和樣品中的雜質(zhì)易造成色譜柱內(nèi)填料污染，導(dǎo)致拖尾峰出現(xiàn)。
  • 解決方法：
    1.流動(dòng)相所用的各種溶劑至少是分析純，盡量使用色譜純?cè)噭?/span>
    2.流動(dòng)相所用的水最好是超純水或全玻璃器皿雙蒸水。用前先用0.45um溶劑微孔過濾（器）過濾，除去可能存在的微粒。
    3.流動(dòng)相建議現(xiàn)用現(xiàn)配，對(duì)于含鹽的溶液尤其注意長(zhǎng)置會(huì)產(chǎn)生細(xì)菌或出現(xiàn)沉淀。此外還得保證儲(chǔ)存流動(dòng)相的容器清潔。
    4.復(fù)雜樣品可選用0.45um溶劑微孔過濾（器）或樣品預(yù)處理柱對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理，確保樣品中不含微粒雜質(zhì)。若樣品不便處理，要使用保護(hù)柱。



色譜柱被堵塞

  • 原因：色譜柱的進(jìn)出口的篩板堵塞，樣品進(jìn)入色譜柱時(shí)會(huì)受阻，液體流動(dòng)受阻形成延遲，使得樣品在相中停留時(shí)間變長(zhǎng)，從而使峰型拖尾。

  • 解決方法：

    1.配置流動(dòng)相時(shí)污染流動(dòng)相使用色譜純?nèi)芤海F(xiàn)配現(xiàn)用，并通過4.5um濾膜過濾后方可使用。

    2.型號(hào)規(guī)格插口不匹配，在扭緊的時(shí)候造成形變而促使管道阻塞。色譜柱有物理?yè)p壞是會(huì)造成峰形拖尾。唯一的解決方法就是更換新柱。

    3.樣品存在雜質(zhì)，導(dǎo)致堵塞在篩板處，過濾樣品

    4.應(yīng)用較高濃的緩存鹽溶液，在關(guān)機(jī)時(shí)將會(huì)在出入口端結(jié)晶體成塊并導(dǎo)致阻塞。

5.適當(dāng)降低溫度，讓試劑溶解得慢一些。

6.如以上方法都不能解決堵塞問題，則需考慮換一根新的手性色譜柱。




樣品濃度過高致使柱超載

  • 原因：樣品在柱上超載能引起峰展寬，拖尾（或伸舌）。
  • 解決方法：適當(dāng)減小進(jìn)樣量或樣品濃度（需要時(shí)，可提高檢測(cè)器靈敏度）直至峰形和保留時(shí)間不再改變，便可消除這種不良影響。減小進(jìn)樣量還能改善其分離度。正常情況下，樣品中每種化合物在150×4.6mm柱中進(jìn)樣量保持在3～50ug范圍內(nèi)，不會(huì)引起明顯超載。



柱外效應(yīng)

  • 原因：柱外效應(yīng)（即進(jìn)樣閥、色譜柱及檢測(cè)器間的管路過長(zhǎng)、直徑過粗、管路接頭不匹配、有死體積）是指色譜柱之外的造成色譜峰展寬的成因。
  • 解決方法：在可能的條件下，色譜柱要使用合理管長(zhǎng)的管路，連接管內(nèi)徑盡可能窄小，切口務(wù)必平整光滑，同時(shí)流速需要合理不要過快，可采用色譜柱推薦的流速，以防止因樣品擴(kuò)散造成不能反映色譜柱真實(shí)柱效等情況發(fā)生。



硅醇基團(tuán)作用

  • 原因：仔細(xì)分析色譜柱內(nèi)填料表面性質(zhì)可知：反相色譜柱填料的表面大約被鍵合相覆蓋了一半，其余的就是未被鍵合的硅醇基團(tuán)。所謂的保留是指樣品分子與鍵合相相互作用的結(jié)果。但是，酸性或堿性化合物與硅膠表面殘存的硅醇基團(tuán)或金屬雜質(zhì)之間相互作用而引起雙重保留機(jī)理，因此，發(fā)生了峰形拖尾。
  • 解決方法：為了減小峰形拖尾，通常可在流動(dòng)相加入25mM三乙胺（抑制劑）。三乙胺能與硅醇基團(tuán)發(fā)生強(qiáng)烈的相互作用，從而降低或阻斷樣品分子與硅醇基團(tuán)的作用，以保證保留機(jī)理正常進(jìn)行，并大大緩解了峰形拖尾。建議使用長(zhǎng)鏈的硅醇基抑制劑，雖起效較慢，但持續(xù)力較三乙胺長(zhǎng)。因?yàn)橐种苿┓肿又谐税坊c硅醇基團(tuán)發(fā)生極性作用外，大分子中非極性部分與固定相也會(huì)發(fā)生反相作用而產(chǎn)生保留現(xiàn)象。如果將抑制劑加至樣品中，效果會(huì)顯著。



柱內(nèi)金屬污染

  • 原因：柱內(nèi)金屬污染（Fe，Ni等）可引起峰形拖尾。金屬可由填料本身帶進(jìn)，也可由腐蝕性流動(dòng)相緩慢溶解柱進(jìn)口的金屬濾片，隨流動(dòng)相沉積到柱填料中。
  • 解決方法：若色譜柱內(nèi)填料被金屬污染后，造成酸/堿性樣品拖尾，可用堿洗/酸洗后再鍵合的填料。