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干貨 | HPLC峰型問題之鬼峰原因分析

欄目：行業(yè)資訊 發(fā)布時間：2023-09-25
鬼峰(Ghostpeak)：是對未知來源的色譜峰的統(tǒng)稱。色譜分離過程中，特別是在梯度洗脫或者儀器使用時間過久容易產(chǎn)生時有時無的色譜峰，因此鬼峰最大的特點就是“飄忽不定”，“神出鬼沒”。

鬼峰(Ghostpeak)：是對未知來源的色譜峰的統(tǒng)稱。色譜分離過程中，特別是在梯度洗脫或者儀器使用時間過久容易產(chǎn)生時有時無的色譜峰，因此鬼峰最大的特點就是“飄忽不定”，“神出鬼沒”。

鬼峰

鬼峰是液相色譜中最常出現(xiàn)的問題之一，鬼峰來源多種多樣，理論上講，在HPLC系統(tǒng)中任何一個節(jié)點均有可能引入鬼峰，依據(jù)鬼峰出現(xiàn)的頻率，其主要來源于流動相中含有雜質(zhì)、管路中樣品有殘留、儀器問題以及操作不當?shù)取?/span>

鬼峰原因及解決方法




流動相中含有雜質(zhì)

原因：

  1. 盛放流動相的容器受到污染，導致流動相污染，這種污染可能來自于洗滌劑或是其他實驗人員用完后的殘留雜質(zhì)；
  2. 測量流動相pH時，很多pH計以聚碳酸酯作為外殼，然而聚碳酸酯是可以溶于有機溶劑的；
  3. 流動相在空氣中暴露時間過長，就可能吸收空氣中的有機雜質(zhì)，有時流動相中的添加劑，例如TFA，時間長了會氧化從而產(chǎn)生雜質(zhì)。
解決方法：

  1. 流動相容器的清洗一般用干凈的水+有機溶劑涮洗就行，過多的清洗步驟反而可能造成二次污染。（有時流動相容器的塑料蓋碎片都有可能是雜質(zhì)的來源）；

  2. 盡量使用玻璃pH計來測量流動相的pH；
  3. 流動相盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。



管路樣品殘留

原因：

  1. 連續(xù)進樣，在某個位置出現(xiàn)忽高忽低的峰，最可能是進樣針污染；

  2. 分析樣品時峰沒出完，鬼峰在下一針或下下一針出現(xiàn)；

  3. 由于長時間的使用含水量較高的流動相（尤其是加入緩沖鹽的），細菌就容易在管路中滋生，細菌的代謝產(chǎn)物或是細胞碎片能造成鬼峰。

解決方法：

  1. 定期將進樣針取下來進行檢查，需要時請進行手動清洗，如清洗無效，更換進樣針。

  2. 延長分析時間,計算可能出現(xiàn)的保留時間,調(diào)整流動相。

  3. 定期檢查管路，定期清洗管路(注意不要損壞柱和管道系統(tǒng))或更換新的。




氣泡

原因：

  1. 如果有小氣泡通過流通池，也出現(xiàn)隨機的假峰；

  2. 大氣泡存在，也出現(xiàn)隨機的假峰。

解決方法：對流動相進行脫氣




溫度

原因：

  1. 進樣時，溫度過高會導致樣品碳化、隔膜分介；

  2. 溫度過低，樣品過冷，在進樣口停留時間太長造成吸附現(xiàn)象。

解決方法：

  1. 進樣時，進樣口溫度過高時，降低進樣口溫度；

  2. 溫度過低時增高進樣口溫度，加大載氣流速趕去吸附物。