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干貨 | HPLC峰型問題之分叉峰原因分析

欄目：行業(yè)資訊 發(fā)布時間：2023-10-07
在HPLC中，色譜峰的頂端出現(xiàn)分叉的峰叫做分叉峰，分叉峰的出現(xiàn)與樣品的進樣量和色譜柱等因素有關(guān)。
在HPLC中，色譜峰的頂端出現(xiàn)分叉的峰叫做分叉峰，分叉峰的出現(xiàn)與樣品的進樣量和色譜柱等因素有關(guān)。

分叉峰

分叉峰原因及解決方法




溶劑效應(yīng)

原因：大體積進樣，導致樣品產(chǎn)生的峰過早的洗脫出色譜柱，從而導致分叉峰。
解決方法：對樣品進行蒸發(fā)濃縮，從而減少進樣體積；或者進樣溶劑改為用水稀釋，與流動相更為兼容，即使進樣體積較大也不會出現(xiàn)峰變形。較早流出的峰或靠近溶劑前沿的峰更容易出現(xiàn)拖尾。在液相色譜中用溶于流動相的小體積進樣最為理想。
注意：樣品要現(xiàn)配現(xiàn)用，避免樣品溶解液的有機相比例、pH值發(fā)生變化而導致的溶劑效應(yīng)



色譜柱篩板堵塞

原因：色譜柱的進出口的篩板堵塞，樣品進入色譜柱時會受阻，液體流動受阻形成延遲，使得樣品在相中停留時間變長，從而使峰型拖尾。
解決方法：
配置流動相時污染流動相使用色譜純?nèi)芤?，現(xiàn)配現(xiàn)用，并通過4.5um濾膜過濾后方可使用。
型號規(guī)格插口不匹配，在扭緊的時候造成形變而促使管道阻塞。色譜柱有物理損壞是會造成峰形拖尾。唯一的解決方法就是更換新柱。
樣品存在雜質(zhì)，導致堵塞在篩板處，過濾樣品
應(yīng)用較高濃的緩存鹽溶液，在關(guān)機時將會在出入口端結(jié)晶體成塊并導致阻塞。
適當降低溫度，讓試劑溶解得慢一些。
如以上方法都不能解決堵塞問題，則需考慮換一根新的色譜柱。



保護柱或色譜柱污染

原因：復雜的樣品基質(zhì)容易造成保護柱阻塞或污染，進而產(chǎn)生色譜峰分叉的現(xiàn)象。色譜柱在開始使用時沒問題，而使用一段時間后出現(xiàn)峰分叉的現(xiàn)象，很可能是由于色譜柱阻塞或者被污染引起。
解決方法：取下保護柱再進行分析，如有必要可更換保護柱。如果色譜柱阻塞，拆下來清洗，如果問題仍然存在，可能是柱子被強保留物質(zhì)污染，建議將更換色譜柱。



色譜柱塌陷

原因：色譜柱通常都有其適用的pH、溫度范圍，若使用不當會造成色譜柱填料塌陷，從而導致色譜峰分叉。
解決方法：由于色譜柱塌陷引起的色譜峰分叉很難修復，建議更換新的色譜柱。