高效液相色譜儀(HPLC)由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。檢測器是HPLC的關鍵組成部分之一，它將色譜柱連續(xù)流出的樣品組分轉(zhuǎn)變成易于測量的電信號，被數(shù)據(jù)系統(tǒng)接收，得到樣品分離的色譜圖。常用檢測器有紫外吸收、熒光、示差折光、化學發(fā)光等。接下來讓我們詳細介紹一下在液相色譜中六種檢測器的原理及特點。
紫外檢測器是一種應用最廣HPLC檢測器，當檢測波長范圍包括可見光時，又稱為紫外-可見檢測器。紫外檢測器的工作原理是朗伯-比爾（Lambert-Beer）定律。其特點是靈敏度高（檢測下限為10-10g/ml），線性范圍寬，噪聲低，它的最重要特征是對流動相的流速和溫度變化不敏感，適用于梯度洗脫，對強吸收物質(zhì)檢測限可達1ng，檢測后不破壞樣品，可用于制備，并能與任何檢測器串聯(lián)使用。紫外可見檢測器的工作原理與結(jié)構(gòu)同一般分光光度計相似，實際上就是裝有流動相的紫外可見光度計。 因此即使是那些光吸收小、消光系數(shù)低的物質(zhì)也可用UV檢測器進行微量分析。但它只能檢測有紫外吸收的物質(zhì)，而且流動相有一定限制，即流動相的截止波長應小于檢測波長。如果溶劑中含有吸光雜質(zhì)，則會提高背景噪音，降低靈敏度。此外，梯度洗脫時或測定波長較短時，基線還會產(chǎn)生漂移。光電二極管陣列檢測器(PAD)原理與UVD相同，區(qū)別在于PAD可檢測到所有波長的吸收值，是全掃描光譜圖。PAD的優(yōu)點是可以獲得樣品組分的全部光譜信息。
即，在一次色譜操作中，可同時獲得吸光值、流出時間和各組分的紫外-可見光譜圖在一起的三維譜圖，提供既定量又定性的色譜信號。吸收光譜用于組分的定性，色譜峰面積用于定量。使用二極管陣列檢測器，可以對色譜峰進行光譜掃描，峰純度鑒定的定性分析，在方法研究中可以快速選擇最佳檢測波長，在多組分混合物分析中可以編輯波長程序。采用二極管陣列檢測器進行論證，也是目前常采用的一個強有力的手段。它通過對一個色譜峰的數(shù)點進行紫外掃描，然后比較所得到的掃面圖譜的接近程度從而評價被檢測峰的純度。但是，利用二極管陣列檢測器進行峰純度檢查存在兩個缺點：1、雜質(zhì)濃度低，或與主成分相比吸收太小，達不到檢測靈敏度，無法檢測出來。2、當雜質(zhì)的發(fā)色團與主成分一致，或者說雜質(zhì)與主組分有相同或幾乎相同的光譜圖且具相近的流出時間，此時雜質(zhì)也無法發(fā)現(xiàn)。熒光檢測器是一種高靈敏的選擇性檢測器，其靈敏度比紫外檢測器高10-1000倍。它適用于檢測能產(chǎn)生熒光的化合物。某些不發(fā)熒光的物質(zhì)可通過化學衍生化生成熒光衍生物，再進行熒光檢測。它的原理為有機共軛芳環(huán)分子受紫外光激發(fā)后發(fā)出熒光。
熒光檢測器其靈敏度很高，痕量分析和梯度洗脫樣品的檢測均可采用。其最小檢測濃度可達0.1ng／ml，適用于痕量分析；一般情況下熒光檢測器的靈敏度比紫外檢測器約高2個數(shù)量級，但其線性范圍不如紫外檢測器寬。
可用于熒光檢測的物質(zhì)有某些代謝物、食品、藥物、氨基酸、多肽、生物堿和甾族化合物等。由于熒光檢測器的高靈敏度和選擇性，它是體內(nèi)藥物分析常用的檢測器之一。 但其基線穩(wěn)定需要平衡的時間較長。
示差折光檢測器的檢測基于被分析物的折光指數(shù)的差異，即測量樣品流路與參比流路在折光指數(shù)上的差別。當折光指數(shù)差異最大時靈敏度也達到最大。它并不測量絕對的折光指數(shù)而是測定折光指數(shù)的差別。其典型的應用領域為沒有紫外吸收、熒光的化合物，例如：碳水化合物、聚合物脂肪酸及油脂類等。光從一種介質(zhì)進入另一種介質(zhì)時，由于兩種物質(zhì)的折射率不同就會產(chǎn)生折射。只要樣品組分與流動相的折光指數(shù)不同，就可被檢測，二者相差愈大，靈敏度愈高，在一定濃度范圍內(nèi)檢測器的輸出與溶質(zhì)濃度成正比。示差檢測器為通用檢測器，容易使用。通常來說是比較耐用的檢測器，維護成本低。但其靈敏度低、選擇性差，對流速、溫度及粘度的變化敏感，不能用于梯度洗脫。而且，色譜峰可能是正的，也可能是負的。電化學檢測器包括極譜、庫侖、安培和電導檢測器等。電導檢測器廣泛用于離子色譜儀中，應用于能電離成離子物質(zhì)的檢測，其響應受溫度影響較大。
安培檢測器應用最廣泛，其靈敏度很高，尤其適合于痕量組分的分析，凡具氧化還原活性的物質(zhì)都能進行檢測，如活體透析液中的生物胺，還有酚、羰基化合物、巰基化合物等。本身沒有氧化還原活性的化合物經(jīng)過衍生化后，也能進行檢測。
電化學檢測器是根據(jù)電化學原理和物質(zhì)的電化學性質(zhì)進行檢測。在液相色譜中，它可以檢測出所有電活性物質(zhì)。因此，對部分沒有紫外吸收或不能發(fā)出熒光但具有電活性的物質(zhì)，可采用電化學檢測法進行檢測。若在分離柱后采用衍生技 術，還可將它擴展到非電活性物質(zhì)的檢測。
化學發(fā)光檢測器（Chemiluminescence detector， CD）是近年來發(fā)展起來的一種快速、靈敏的新型檢測器，因其設備簡單、價廉、線性范圍寬等優(yōu)點。其原理是基于某些物質(zhì)在常溫下進行化學反應，生成處于激發(fā)態(tài)勢反應中間體或反應產(chǎn)物，當它們從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時，就發(fā)射出光子。
由于物質(zhì)激發(fā)態(tài)的能量是來自化學反應，故叫作化學發(fā)光。當分離組分從色譜柱中洗脫出來后，立即與適當?shù)幕瘜W發(fā)光試劑混合，引起化學反應，導致發(fā)光物質(zhì)產(chǎn)生輻射，其光強度與該物質(zhì)的濃度成正比。
這種檢測器不需要光源，也不需要復雜的光學系統(tǒng)，只要有恒流泵，將化學發(fā)光試劑以一定的流速泵入混合器中，使之與柱流出物迅速而又均勻地混合產(chǎn)生化學發(fā)光，通過光電倍增管將光信號變成電信號，就可進行檢測。這種檢測器的最小檢出量可達10-12g。
在化學史上有許許多多精美絕倫的實驗，美國的“化學與工程新知”組織在2003年，邀請全球的眾多化學家和歷史學家共同投票選出十大最美麗實驗，排名第一的是19世紀中葉巴斯德在顯微鏡下手工分離手性酒石酸鹽晶體。蒸發(fā)光檢測器(ELSD)是基于光線通過微小的粒子會產(chǎn)生光散射現(xiàn)象的原理。樣品經(jīng)色譜柱分離后會被氮氣噴為霧狀液滴，云霧狀溶質(zhì)顆粒通過光路后產(chǎn)生光散射。ELSD要優(yōu)越于RID，靈敏度及檢出限高，對溫度敏感程度低，適用于梯度淋洗。
檢測器是高效液相色譜儀的重要組成部分，不同的檢測器的原理、使用的范圍和對象不同。所以針對不同的檢測器，我們應該注意的重點也不同。只有這樣，才能更好地完成日常的分析檢測工作，提高工作效率。
地址：廣州市黃埔區(qū)攬月路3號國際企業(yè)孵化器F座310
電話：18922204815 
傳真：020-84418344
郵箱：mzzhang@chiral-se.com
