在高效液相色譜分析中,基線是指色譜柱經(jīng)流動相沖洗,與流動相達到平衡后,檢測器在一段時間內(nèi)測出的信號曲線。在色譜儀各項檢測條件正常的情況下,基線應(yīng)平行于時間軸。然而,高效液相色譜基線不穩(wěn)定可能由多種因素導(dǎo)致,這些因素涉及液相色譜系統(tǒng)的多個組成部分。以下是一些常見的原因及其相應(yīng)的解決方法:
原因:色譜柱在更換流動相或長時間未使用后,需要一定的時間來達到平衡狀態(tài)。在平衡過程中,基線可能會出現(xiàn)波動。 解決方法:使用中等強度的溶劑沖洗色譜柱,特別是在更換流動相時,應(yīng)先用10到20倍體積的新流動相進行沖洗,以確保色譜柱充分平衡。 原因:色譜柱中的氣泡會影響流動相的流動性和色譜峰的形狀,從而導(dǎo)致基線不穩(wěn)定。 解決方法:在檢測器的水池出口加負壓調(diào)節(jié)器,以減少氣泡的生成。同時,檢查色譜柱的連接處是否緊密,防止空氣進入。
原因:流動相中的溶解氣體會在色譜柱內(nèi)析出,形成微小氣泡,影響基線穩(wěn)定性。 解決方法:對流動相進行超聲波脫氣處理,時間一般為15-30分鐘?;蛘咄ㄟ^充氮等方式去除溶解氣體。 原因:流動相的配比或流速的變化會直接影響色譜峰的分離效果和基線穩(wěn)定性。 解決方法:根據(jù)實驗需求調(diào)整流動相的配比和流速,并定期檢查流動相的組成及流速,確保其穩(wěn)定性。
原因:止回閥堵塞會導(dǎo)致流動相流動不暢,引起基線波動。 解決方法:拆除單向閥,用超聲波在純水中浸泡20分鐘以上,清除堵塞物。 原因:墊片損壞會導(dǎo)致泵壓不穩(wěn),進而影響基線穩(wěn)定性。 解決方法:更換高壓泵的密封墊,確保泵壓穩(wěn)定。 原因:泵中的氣泡會隨流動相進入色譜柱,影響基線穩(wěn)定性。 解決方法:檢查泵的進液口和排液口,確保無氣泡產(chǎn)生。如有必要,可拆開泵體進行清洗和排氣。
原因:如果檢測器的波長沒有設(shè)置在樣品的最大吸收波長處,會導(dǎo)致基線不穩(wěn)定。 解決方法:將探測器的測試波長調(diào)整到樣品的最大吸收波長處。 原因:長期使用后,檢測器內(nèi)部可能會積累污染物,影響基線穩(wěn)定性。 解決方法:定期清洗檢測器,去除污染物??梢允褂眉状蓟蚱渌麖?span id="hbb5s0wc1vc" class="">極性溶劑進行沖洗。
其他因素
原因:柱溫的微小變化都可能引起基線的波動。 解決方法:控制好柱子和流動相的溫度,在檢測器之前使用熱交換器來穩(wěn)定溫度。 原因:系統(tǒng)中可能存在漏液點,導(dǎo)致流動相流失和基線不穩(wěn)定。 解決方法:檢查管路接頭是否松動、泵是否漏液等,確保系統(tǒng)密封性良好。
綜上所述,高效液相色譜基線不穩(wěn)定可能由多種因素導(dǎo)致。在解決問題時,需要綜合考慮色譜柱、流動相、泵、檢測器以及系統(tǒng)其他部分的狀況,并采取相應(yīng)的措施進行調(diào)整和優(yōu)化。