在使用通用型反相色譜柱前,應(yīng)對(duì)其性能進(jìn)行測(cè)試,并將結(jié)果記錄保存,以便未來(lái)評(píng)估柱性能的變化。但需注意,柱性能可能因樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的不同而有所差異。此外,進(jìn)行柱性能測(cè)試時(shí),應(yīng)按照通用型反相色譜柱出廠報(bào)告中列出的條件進(jìn)行(出廠測(cè)試所用的條件為*條件),這樣才能確保測(cè)得結(jié)果具有可比性。
通用反相色譜柱的安裝方法:
1、打開(kāi)柱子包裝盒,檢查色譜柱的類(lèi)型、尺寸、生產(chǎn)日期以及柱內(nèi)所存儲(chǔ)的溶劑。
2、將柱兩端接頭的密封堵頭擰下后,妥善放回包裝盒以備后用。
3、根據(jù)柱管上標(biāo)示的流動(dòng)相流向,將色譜柱的入口端通過(guò)連接管與進(jìn)樣閥的出口連接(如果條件允許,建議在柱前使用保護(hù)柱);同時(shí),將柱的出口與檢測(cè)器相連。連接管的外徑為1.57mm,內(nèi)徑為0.1-0.3mm,材質(zhì)為不銹鋼。連接管的兩端各配有空心螺釘和用于密封的壓環(huán)。在連接時(shí),務(wù)必盡量減小柱外的死體積。連接管應(yīng)通過(guò)空心螺釘和壓環(huán)插入至底部,然后順時(shí)針旋緊空心螺釘,直到無(wú)法繼續(xù)擰動(dòng)為止,隨后用扳手再順時(shí)針擰動(dòng)1/4至1/2圈,切忌用力過(guò)大。如果色譜柱在流動(dòng)相加壓后出現(xiàn)漏液現(xiàn)象,請(qǐng)繼續(xù)用扳手順時(shí)針擰動(dòng)1/4圈,直至不再漏液為止。
完成連接后,進(jìn)行系統(tǒng)的緊密度檢查至關(guān)重要。這通常涉及以較低的流速(如0.2-0.5mL/min)向色譜系統(tǒng)中泵入流動(dòng)相,同時(shí)觀察整個(gè)系統(tǒng),包括連接處、色譜柱以及檢測(cè)器入口,確保無(wú)滲漏現(xiàn)象。若發(fā)現(xiàn)有漏液點(diǎn),應(yīng)立即停止泵流,仔細(xì)檢查并重新緊固相應(yīng)部件,直至完全密封。
接下來(lái),進(jìn)行色譜柱的平衡。根據(jù)待分析樣品的特性,選擇合適的流動(dòng)相組成和pH值,以恒定流速泵入系統(tǒng),讓流動(dòng)相充分浸潤(rùn)色譜柱,此過(guò)程一般需持續(xù)數(shù)小時(shí),以確保柱內(nèi)達(dá)到穩(wěn)定的吸附-解吸平衡狀態(tài)。平衡時(shí)間的長(zhǎng)短可能因柱型、柱溫及流動(dòng)相特性而異。
平衡完成后,即可進(jìn)行色譜柱的性能驗(yàn)證。通過(guò)注入一系列已知濃度和性質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)品溶液,記錄色譜圖,評(píng)估柱效(如理論塔板數(shù))、分辨率、拖尾因子等關(guān)鍵指標(biāo),確保色譜柱滿(mǎn)足分析需求。若性能參數(shù)偏離預(yù)期,需重新檢查安裝步驟或調(diào)整操作條件,直至獲得滿(mǎn)意的分離效果。
至此,通用反相色譜柱的安裝與調(diào)試工作全部完成,它已準(zhǔn)備好迎接日常分析任務(wù),為科研或生產(chǎn)中的樣品分離與鑒定提供可靠支持。