氨基柱是一款既可以正相使用,也可以反相使用,但是我們要注意到的是:正相溶劑和反相溶劑往往是不互溶的,正常情況新氨基柱出廠時(shí)保存在正相環(huán)境中。
1、由于新的氨基柱保存在正己烷-乙腈(99:1)中,與反相流動(dòng)相是不互溶的,因此如果使用反相的方法,必須用至少10倍柱體積的異丙醇沖洗過渡(約2h,0.5mL/min),以除去正相保存溶液。過渡過程中注意因異丙醇粘度較大,會(huì)導(dǎo)致柱壓很高,適當(dāng)調(diào)低流速即可。
2、再用至少10倍柱體積95%水-5%乙腈(或甲醇)沖洗(不含緩沖鹽的流動(dòng)相可省去)過渡,最后用流動(dòng)相平衡。
3、用完后洗柱時(shí),必須先用95%水沖洗至少10倍柱體積,除去所用緩沖鹽(不含緩沖鹽的流動(dòng)相可省去)。然后保存于乙腈/水(80:20)溶液(一個(gè)月內(nèi))中。長(zhǎng)期不用的話,建議用異丙醇保存(一個(gè)月以上)。
4、新柱子一定要置換掉保存溶液,用異丙醇保存的柱子在使用前也需要花一定的時(shí)間給置換掉。
5、反相條件下使用時(shí),要特別注意控制pH值范圍(根據(jù)你色譜柱耐受使用pH),pH值越低越有發(fā)生水解的危險(xiǎn),流動(dòng)相中水的比例越高當(dāng)然也越有發(fā)生水解的危險(xiǎn)。
6、還有一種情況是,當(dāng)使用氨基柱進(jìn)行酸性物質(zhì)的分析時(shí),酸性物質(zhì)的存在意味著質(zhì)子的存在,可能會(huì)使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化,導(dǎo)致使用一段時(shí)間后對(duì)于某些類的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降。