色譜柱的柱效率是評價色譜性能的重要指標。混合物能否在色譜柱中分離，不僅取決于選擇合適的固定相，還取決于手性色譜柱的操作條件和填充條件。

正確使用高效液相色譜柱包括：安裝保護柱、過濾流動相和樣品、凈化樣品、避免柱壓過高、注意溫度和pH值、正確及時清洗等。

1.安裝保護柱

保護柱的作用是過濾掉來自流動相和樣品的化學物質(zhì)“拉圾”同時，還能有效去除流動相和樣品中的不溶物。盡管現(xiàn)在的色譜儀在流動相吸入口.進樣閥后部及色譜柱兩端均設(shè)有1個.2μm不同孔徑的濾器只能去除不溶性顆粒，不能去除化學污染。因此，有必要安裝保護柱，特別是在分析中藥時.中成藥等復雜混合物和生物樣品是保護分析柱的重要措施。

保護柱填料應與分析柱一致，粒徑可大于分析柱。保護柱是消耗品。經(jīng)過一定次數(shù)的樣品分析（50~100次）后，當柱壓明顯升高或峰形變壞或基線漂移時，應考慮更換保護柱。

2.過濾流動相和樣品

流動相通常由水或緩沖溶液與有機溶劑混合而成。原則上，所有通過色譜柱的流動都應過濾，但在實際操作中應根據(jù)具體情況有所不同：當有機溶劑使用色譜純度、石英亞沸水或其他超純水時，過濾在保證水和有機溶劑的質(zhì)量而不受污染時沒有更實際的意義。

當流動相中含有緩沖鹽時，需要過濾。如前所述，緩沖溶液放置一段時間后根據(jù)環(huán)境溫度不同，夏季一般不超過48h,冬季一般不超過一周)，使用前應重新過濾。

注入流路系統(tǒng)前，樣品試液應經(jīng)0.45μm(0.22μm最好過濾孔徑濾膜。注意區(qū)分水系和油系，兩者不能混用，防止濾膜溶解造成污染。

裝有流動相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線過濾器應定期清洗和更換，以避免過載。

3.凈化樣品

樣品中含有對色譜柱有害的化學成分，如吸附蛋白質(zhì).糖和其他有機分子和強吸附物質(zhì)，以及可能破壞柱填料的基團離子。樣品應在進樣前盡可能分離和凈化，以去除多余的雜質(zhì)成分。

4.避免柱壓過高

雖然高效液相色譜柱能承受6000 p si (磅/平方英寸)的壓力，但過高和過大的壓力變化會縮短色譜柱的使用壽命，避免的方法是避免色譜柱的使用壽命

(1)柱壓過高時，盡量采用較小的流速，以免超過柱最大允許壓力的一半。

(2)當流速較大時，應采用流速梯度的方法使流速分步到位。

(3)使用手動進樣閥時，進樣閥的切換應盡可能快。否則，超過20%的壓力沖擊很快就會使柱子報廢。使用多柱共用時，應避免在高壓下進行柱切換。

5.注意溫度和酸堿度

硅膠色譜柱的最高使用溫度一般不超過60℃,以低于40℃特別是在流動相動相pH接近使用限度時，應降低使用溫度。

過高的溫度會加速鍵合相的水解和硅膠的溶解，從而改變填料的性質(zhì)，使柱床塌陷，降低柱效，改變峰形。

目前鍵合硅膠色譜柱標注pH適用范圍可達2~10，但在實際使用中應避免pH條件，特別是堿性條件，特別是堿性條件(pH≥8)下使用，如必須在下使用，pH在條件下使用時，可避免柱損傷：

(1)在泵與進樣閥之間安裝預柱(飽和柱)來飽和流動相

(2)降低使用溫度

(3)檢查結(jié)束后，立即使用與使用的流動相互混溶的流動“溫和溶劑”清洗。

6.正確及時的沖洗

在開始測試之前，你應該知道柱子中目前是什么樣的溶劑。對于新的色譜柱，如果沒有特殊的說明，則是評估報告中使用的流動相。柱中當前的溶劑必須與分析樣品中使用的流動相互溶解。如果不能混合，則應使用第三種溶劑與兩者混合。