手性色譜柱的正確使用和維護非常重要。稍有不慎就會降低柱效，縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，應注意以下問題，以維護手性色譜柱。

1.避免壓力和溫度的急劇變化和任何機械振動。溫度的突然變化或色譜柱從高處脫落會影響柱內(nèi)的填充狀態(tài)；柱壓的突然升降也會沖動柱內(nèi)的填料。因此，調節(jié)流速時應緩慢進行，閥門進樣時不宜過慢旋轉。

2.溶劑的組成應逐漸改變，特別是在反相色譜中，不能直接從有機溶劑改為全水，反之亦然。

3.一般來說，色譜柱不能反沖。只有當生產(chǎn)者指示柱可以反沖時，才能反沖去除留在柱頭上的雜質。否則，反沖會迅速降低柱效。

4.選擇合適的流動相(尤其是流動相)pH)，為了避免固定相的損壞。有時，預柱可以連接到進樣器前面。當分析柱與硅膠鍵合時，預柱為硅膠，使流動相在進入分析柱前提前被硅膠覆蓋“飽和”避免分析柱中的硅膠基質溶解。

5.經(jīng)常用強溶劑沖洗手性色譜柱，去除柱內(nèi)保留的雜質。清洗時，流路系統(tǒng)中流動相的置換應逐漸用混溶溶劑過渡，每個流動相的體積應為柱體體積的20倍左右。

6.保存色譜柱時，柱內(nèi)應充滿乙腈或甲醇，柱接頭應擰緊，防止溶劑揮發(fā)和干燥。絕對禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)過夜或更長時間。

7.在使用手性色譜柱的過程中，如果壓力升高，一種可能是燒結濾片堵塞，應更換濾片或取出清洗；另一種可能是大分子進入柱內(nèi)，污染柱頭；如果柱效率降低或色譜峰變形，柱頭可能塌陷，死體積增大。在后兩種情況下，小心擰開柱接頭，用干凈的小鋼取出柱頭填料1~2mm高度(注意清除污染填料)，然后整平柱內(nèi)填料。然后用適當?shù)娜軇駶櫣潭ㄏ?與柱內(nèi)相同)填充色譜柱，壓平，再擰緊柱接頭。后柱效率提高，但難以恢復到新柱水平。柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前安裝與分析柱固定相同的短柱(5~30mm)，能起到保護、延長柱壽命的作用。使用保護柱會失去一定的柱效，這是值得的。正確使用時，色譜柱的使用壽命一般可達2年以上。以硅膠為基質的填料只能用于硅膠填料pH=在2~9范圍內(nèi)使用。柱子使用一段時間后，柱頂可能會保留一些吸附性強的物質，特別是一些有色物質更容易看到被吸入柱頂?shù)奶盍稀?/p>

8.新色譜柱使用一段時間后，柱頂填料可能會塌陷，降低柱效。此時，還可以添加填料來恢復柱效。每次工作結束后，最好用洗脫能力強的洗脫液沖洗，例如，ODS柱子應該用甲醇沖洗到基線平衡。當使用鹽緩沖溶液作為流動相時，使用后應使用無鹽流動相進行沖洗。含鹵素元素(氟、氯、溴)的化合物可能會腐蝕不銹鋼管道，不應長期接觸。HPLC儀器上的柱子如不常用，應每4~5天開機沖洗15分鐘。