溶劑效應(yīng)指稀釋劑溶劑強度大于流動相時造成色譜峰變形的現(xiàn)象。如用THF溶解樣品，注入流動相為乙腈-水（18:82）的反相系統(tǒng)中，可能會造成峰分叉或拖尾的結(jié)果，還會導(dǎo)致保留時間漂移。

表現(xiàn)為液相色譜上較早洗脫的峰前沿或分叉（也有可能表現(xiàn)為肩峰），較晚洗脫的峰則較為正常。也可能全部峰均出現(xiàn)分叉的情況，視溶劑強度而定。

第一階段：樣品剛被注入系統(tǒng)，進入色譜柱后，流動相氛圍中的目標物以正常速度被洗脫。因強溶劑洗脫，移動速度快，樣品在空間上開始慢慢分裂。

第二階段：在一定時間內(nèi)，溶劑氛圍中的目標物移動始終快一些，前后兩部分距離擴大。但移動快的目標物所處氛圍逐漸被流動相稀釋(注：因為溶劑和流動相均不保留)，其移動速度會逐漸降至正常流速。直到前面目標物的氛圍完全被流動相替代，前后兩部分的距離穩(wěn)定下來。因而，樣品溶劑與流動相洗脫強度差距越大，兩部分目標物最終的距離拉的越大。

第三階段：所有目標物在色譜柱中正常移動，但分裂已不可逆轉(zhuǎn)。

經(jīng)過檢測器，同一目標物給出了兩個色譜峰。其中進柱前即擴散進入流動相的那部分目標物組成了后面的色譜峰，它的保留時間與目標物的真實保留時間基本吻合。

簡單概括，強洗脫溶劑不均衡地參與了目標物的洗脫，使色譜峰保留時間整體提前，而樣品在柱前的不充分擴散導(dǎo)致了峰形扭曲。這種影響輕則導(dǎo)致峰展寬，嚴重時甚至導(dǎo)致峰裂分，給定性定量帶來災(zāi)難。

水（最弱）＜甲醇＜乙腈＜乙醇＜四氫呋喃＜丙醇＜二氯甲烷（最強）

正相色譜系統(tǒng)溶劑強度順序為：

正己烷（最弱）＜醇/正己烷混合＜乙醇＜四氫呋喃

溶解樣品的溶劑強度大于該樣品出峰時流動相強度，樣品溶劑可以看成流動相的一部分，一部分樣品溶解于溶劑中會被迅速洗脫出色譜柱，而一部分樣品溶解于流動相，被流動相洗脫出，這樣會造成色譜峰的展寬或者分叉。

有時，當(dāng)我們使用流動相或流動相中的有機相無法直接溶解樣品，這時很多小伙伴會選擇使用氯仿、甲苯等能溶的溶劑，甚至DMSO這樣的“萬能溶劑”來溶解樣品。這樣進樣的結(jié)果是溶劑與流動相不兼容，溶質(zhì)難以在流動相中擴散。

又如，在做參比制劑的溶出曲線中，溶媒中經(jīng)常加入表面活性劑。而帶有表面活性劑的溶劑進樣后，由于溶質(zhì)在含有表面活性劑的溶劑中的分配系數(shù)與在流動相中的分配系數(shù)存在較大差異，就會導(dǎo)致峰形的問題，甚至保留時間的漂移。

這就是為什么有時候會發(fā)現(xiàn)，HPLC的液相（管路死體積大）比UPLC的液相（管路死體積?。┥V峰型好。

1.導(dǎo)致柱效下降，影響分離。

2.影響峰形，甚至影響定量、定性結(jié)果。比如，在LCMS中，掃描前體離子時，遇到這種情況，甚至不知道哪個峰才是目標物。

3.當(dāng)標樣和樣品的溶劑不一致時，保留時間不吻合，同樣影響定性。如酒類成分分析，標樣溶于純水，樣品是過濾的酒，后者的溶劑就是乙醇水，它的保留時間必定早于純水溶解的標樣；再比如水中污染物分析，目標物溶于有機相得到標樣，而樣品是過濾后的天然水；

4.強洗脫的溶劑在基質(zhì)中提取出的雜質(zhì)遇流動相會析出，堵塞針座、柱前管路或色譜柱。

調(diào)整稀釋劑或流動相，使二者洗脫能力接近，或稀釋劑洗脫能力稍低于流動相。

一般情況下，為避免溶劑強度差異導(dǎo)致的溶劑效應(yīng)，反相色譜中較為穩(wěn)妥的做法是稀釋劑中有機相比例和流動相相當(dāng)，必要時可略高于流動相，但應(yīng)當(dāng)據(jù)其評估其溶劑效應(yīng)風(fēng)險。

如下圖，我們在分析手性化合物時發(fā)現(xiàn)所有主峰均出現(xiàn)肩峰（或分叉峰），這種情況很容易考慮沒拆開。但所有主峰都分叉的現(xiàn)象在手性化合物分析中是非常罕見的，考慮溶劑效應(yīng)后，用流動相溶解樣品后，肩峰消失。

為保證峰形，進樣體積一般控制在5-20μL，盡量不超過25μL。

如不能減少至合適的進樣體積，應(yīng)盡量選擇與流動相比例相同或接近的溶劑。

使溶劑與流動相有較好兼容，目前辦法有兩個：

a. 若流動相或流動相中的有機相無法直接溶解樣品，則用可以溶解樣品的溶劑溶解成高濃度儲備液，然后用流動相稀釋至所需濃度。

b. 在流動相中加入同樣的助溶劑或表面活性劑，或提高有機相的比例。

電離狀態(tài)的差異許多情況下會表現(xiàn)為保留時間的漂移或不穩(wěn)定?？梢酝ㄟ^將樣品溶液的pH調(diào)節(jié)至與流動相一致，或增大流動相的緩沖能力來改善。

若采用梯度洗脫，在不影響分離度的情況下，可以改用較粗內(nèi)徑的柱前管路。但此法不適用于等度洗脫，會降低柱效。