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液相色譜樣品預(yù)處理的注意事項(xiàng),你都知道嗎?

欄目:行業(yè)資訊 發(fā)布時(shí)間:2024-03-11
一般情況下,實(shí)驗(yàn)室樣品在進(jìn)行分析之前都需要進(jìn)行預(yù)處理,樣品預(yù)處理的同時(shí)也會(huì)帶來(lái)一些問(wèn)題,如樣品損失、樣品被污染、衍生化反應(yīng)不完全或多種反應(yīng)物生成等,液相色譜樣品預(yù)處理要注意哪些問(wèn)題呢?

一般情況下,實(shí)驗(yàn)室樣品在進(jìn)行分析之前都需要進(jìn)行預(yù)處理,樣品預(yù)處理的同時(shí)也會(huì)帶來(lái)一些問(wèn)題,如樣品損失、樣品被污染、衍生化反應(yīng)不完全或多種反應(yīng)物生成等,液相色譜樣品預(yù)處理要注意哪些問(wèn)題呢?

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樣品預(yù)處理應(yīng)包括進(jìn)樣前的一切操作,除了稱重、溶解、稀釋等步驟外,樣品需要:①過(guò)濾;②萃取;③衍生化(柱前衍生);④液相色譜(低壓柱層析)等。這些操作可以是手工進(jìn)行或?qū)嵭凶詣?dòng)化操作,樣品預(yù)處理的目的是除去干擾物、增加檢測(cè)器靈敏度(富集)、保護(hù)色譜柱等。

由于某些樣品經(jīng)預(yù)處理后還不能做進(jìn)樣分析,需進(jìn)行衍生化處理,使一些無(wú)紫外吸收或無(wú)熒光的組分,經(jīng)過(guò)衍生化后能用紫外和熒光檢測(cè)器檢測(cè),這樣既提高了靈敏度,又改善了分離度(質(zhì)量變化)。樣品預(yù)處理的同時(shí)也會(huì)帶來(lái)一些問(wèn)題,如樣品損失、樣品被污染、衍生化反映不完全或多種反應(yīng)物生成等。




萃取問(wèn)題

萃取的目的是從共溶的樣品介質(zhì)中分離出被分析的組分,或者減少損壞柱的物質(zhì)(如蛋白質(zhì)等)和干擾物。一般采用有機(jī)溶劑萃取,要求萃取用的溶劑毒性低、揮發(fā)性好、雜質(zhì)少、對(duì)待測(cè)樣品有良好的溶解度且又與水不相混溶。

常用的有乙醚、醋酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、苯或者兩種以上的混合溶劑。萃取后一般可直接進(jìn)樣,有時(shí)需要濃縮或吹干濃縮,再用定體積的液體或流動(dòng)相溶解進(jìn)樣。這樣既增加了樣品濃度,又提高了靈敏度的同時(shí)避免了溶劑峰對(duì)樣品峰的干擾。在萃取是要考慮樣品分子的溶解能力。除了脂溶性和水溶性組分外,還有用脂溶性的組分制成水溶性的鹽,萃取方法如下:

水溶性樣品:

1、酸性組分及生成的鹽萃取方法:

有機(jī)溶劑萃取雜質(zhì)后調(diào)成酸性,再加有機(jī)溶劑萃取或進(jìn)樣,或在N?流下吹干,用適當(dāng)?shù)娜軇┙夂筮M(jìn)樣。

2、堿性組分及生成的鹽萃取方法:

有機(jī)溶劑萃取雜質(zhì)后調(diào)成堿性,再加有機(jī)溶劑萃取或進(jìn)樣,或在N?流下吹干,用適當(dāng)?shù)娜軇┤芙夂筮M(jìn)樣。

3、中性組分萃取方法:

①有機(jī)溶劑萃取雜質(zhì)后,直接用反相色譜法分析;

②脂溶性組分萃取方法:有機(jī)溶劑萃取或進(jìn)樣,或在N?流下吹干,用適當(dāng)?shù)娜軇┤芙夂筮M(jìn)樣;





污染問(wèn)題

一般檢測(cè)的環(huán)境、容器、試劑都是影響測(cè)定結(jié)果的因素。

1、環(huán)境污染儀器室的有害氣體、氣溶液、灰塵等等都能造成污染,影響檢測(cè)結(jié)果,這種污染很難校正。因此,儀器室與其他實(shí)驗(yàn)室應(yīng)隔離,保持清潔,儀器室內(nèi)應(yīng)安裝空調(diào),注意:防潮、防腐、防震、空氣相對(duì)濕度應(yīng)小于70%為宜。

2、容器實(shí)驗(yàn)室常用的器皿有玻璃類(lèi)、瓷類(lèi)、石英類(lèi)、塑料類(lèi)等,在進(jìn)行分析時(shí),應(yīng)按照待則樣品的要求來(lái)選則器皿,不管使用哪種器皿,容器的洗條清潔都是很重要的,也是取得好的檢測(cè)結(jié)果的基本保證。

3、試劑在液相色譜分析中,所選用的試劑必須是色譜純、優(yōu)級(jí)純或分析純,如果用含量有雜質(zhì)的試劑,則會(huì)出現(xiàn)雜峰而影響測(cè)定結(jié)果。




標(biāo)準(zhǔn)溶液的問(wèn)題

在配置標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí),先要配置現(xiàn)定濃度的內(nèi)標(biāo)溶液,在標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液中最好使用同一批次配制的內(nèi)標(biāo)溶液以減少誤差。

1、配制標(biāo)準(zhǔn)溶液的物質(zhì)應(yīng)當(dāng)是色譜純的、性質(zhì)穩(wěn)定。

2、常用的標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)存放在棕色溶液瓶中低溫保存。

3、在配制維生素類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)品時(shí),要放置在棕色容量瓶中或避光放置以免分解。

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其他問(wèn)題

1、色譜圖中出現(xiàn)無(wú)關(guān)的峰,原因有可能是樣品過(guò)濾器帶來(lái)污染,解決方法如下:

(1)將過(guò)濾器浸泡在樣品溶劑中并進(jìn)樣試驗(yàn);

(2)改變過(guò)濾器類(lèi)型;

(3)采用交替清洗技術(shù);

2、一些或全部化合物的峰比預(yù)期的小,尤其是低濃度的樣品,原因可能是樣品過(guò)濾器表面吸附下降,解決方法如下:

(1)改變過(guò)濾器類(lèi)型;

(2)嚴(yán)格按相同條件處理所用樣品;

(3)采用交替清洗技術(shù)。

3、回收率太低或差,原因可能是萃取不完全,解決方法如下:

(1)增加萃取時(shí)間,使用熱溶劑;

(2)修改清洗方法;

4、色譜峰變寬,柱壽命縮短,原因可能是樣品帶來(lái)的干擾與污染,應(yīng)改進(jìn)清洗方法。

5、精度差,原因可能是回收不完全,解決方法如下:

(1)改進(jìn)或替換衍生化、分離、萃取或其他條件;

(2)用自動(dòng)化處理裝置提高精度;

小結(jié)

總之,對(duì)分析儀器來(lái)說(shuō),避免故障的最主要的做法是正確的操作和調(diào)節(jié),切忌盲目操作,減少各種系統(tǒng)誤差要注意以上要點(diǎn),并且還要注意日常的儀器保養(yǎng),日常色譜柱的維護(hù),儀器室保持清潔,這樣才能使液相色譜處于最佳工作狀態(tài),在分析中發(fā)揮其重要的作用。