一般情況下,實驗室樣品在進行分析之前都需要進行預處理,樣品預處理的同時也會帶來一些問題,如樣品損失、樣品被污染、衍生化反應不完全或多種反應物生成等,液相色譜樣品預處理要注意哪些問題呢?
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樣品預處理應包括進樣前的一切操作,除了稱重、溶解、稀釋等步驟外,樣品需要:①過濾;②萃??;③衍生化(柱前衍生);④液相色譜(低壓柱層析)等。這些操作可以是手工進行或實行自動化操作,樣品預處理的目的是除去干擾物、增加檢測器靈敏度(富集)、保護色譜柱等。
由于某些樣品經(jīng)預處理后還不能做進樣分析,需進行衍生化處理,使一些無紫外吸收或無熒光的組分,經(jīng)過衍生化后能用紫外和熒光檢測器檢測,這樣既提高了靈敏度,又改善了分離度(質(zhì)量變化)。樣品預處理的同時也會帶來一些問題,如樣品損失、樣品被污染、衍生化反映不完全或多種反應物生成等。
萃取問題萃取的目的是從共溶的樣品介質(zhì)中分離出被分析的組分,或者減少損壞柱的物質(zhì)(如蛋白質(zhì)等)和干擾物。一般采用有機溶劑萃取,要求萃取用的溶劑毒性低、揮發(fā)性好、雜質(zhì)少、對待測樣品有良好的溶解度且又與水不相混溶。常用的有乙醚、醋酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、苯或者兩種以上的混合溶劑。萃取后一般可直接進樣,有時需要濃縮或吹干濃縮,再用定體積的液體或流動相溶解進樣。這樣既增加了樣品濃度,又提高了靈敏度的同時避免了溶劑峰對樣品峰的干擾。在萃取是要考慮樣品分子的溶解能力。除了脂溶性和水溶性組分外,還有用脂溶性的組分制成水溶性的鹽,萃取方法如下:水溶性樣品:1、酸性組分及生成的鹽萃取方法:有機溶劑萃取雜質(zhì)后調(diào)成酸性,再加有機溶劑萃取或進樣,或在N?流下吹干,用適當?shù)娜軇┙夂筮M樣。2、堿性組分及生成的鹽萃取方法:有機溶劑萃取雜質(zhì)后調(diào)成堿性,再加有機溶劑萃取或進樣,或在N?流下吹干,用適當?shù)娜軇┤芙夂筮M樣。3、中性組分萃取方法:①有機溶劑萃取雜質(zhì)后,直接用反相色譜法分析;②脂溶性組分萃取方法:有機溶劑萃取或進樣,或在N?流下吹干,用適當?shù)娜軇┤芙夂筮M樣;污染問題一般檢測的環(huán)境、容器、試劑都是影響測定結果的因素。1、環(huán)境污染儀器室的有害氣體、氣溶液、灰塵等等都能造成污染,影響檢測結果,這種污染很難校正。因此,儀器室與其他實驗室應隔離,保持清潔,儀器室內(nèi)應安裝空調(diào),注意:防潮、防腐、防震、空氣相對濕度應小于70%為宜。2、容器實驗室常用的器皿有玻璃類、瓷類、石英類、塑料類等,在進行分析時,應按照待則樣品的要求來選則器皿,不管使用哪種器皿,容器的洗條清潔都是很重要的,也是取得好的檢測結果的基本保證。3、試劑在液相色譜分析中,所選用的試劑必須是色譜純、優(yōu)級純或分析純,如果用含量有雜質(zhì)的試劑,則會出現(xiàn)雜峰而影響測定結果。標準溶液的問題在配置標準溶液時,先要配置現(xiàn)定濃度的內(nèi)標溶液,在標準溶液和樣品溶液中最好使用同一批次配制的內(nèi)標溶液以減少誤差。1、配制標準溶液的物質(zhì)應當是色譜純的、性質(zhì)穩(wěn)定。2、常用的標準溶液應存放在棕色溶液瓶中低溫保存。3、在配制維生素類標準品時,要放置在棕色容量瓶中或避光放置以免分解。圖片來源于網(wǎng)絡,侵刪其他問題1、色譜圖中出現(xiàn)無關的峰,原因有可能是樣品過濾器帶來污染,解決方法如下:(1)將過濾器浸泡在樣品溶劑中并進樣試驗;(2)改變過濾器類型;(3)采用交替清洗技術;2、一些或全部化合物的峰比預期的小,尤其是低濃度的樣品,原因可能是樣品過濾器表面吸附下降,解決方法如下:(1)改變過濾器類型;(2)嚴格按相同條件處理所用樣品;(3)采用交替清洗技術。3、回收率太低或差,原因可能是萃取不完全,解決方法如下:(1)增加萃取時間,使用熱溶劑;(2)修改清洗方法;4、色譜峰變寬,柱壽命縮短,原因可能是樣品帶來的干擾與污染,應改進清洗方法。5、精度差,原因可能是回收不完全,解決方法如下:(1)改進或替換衍生化、分離、萃取或其他條件;(2)用自動化處理裝置提高精度;小結
萃取問題
萃取的目的是從共溶的樣品介質(zhì)中分離出被分析的組分,或者減少損壞柱的物質(zhì)(如蛋白質(zhì)等)和干擾物。一般采用有機溶劑萃取,要求萃取用的溶劑毒性低、揮發(fā)性好、雜質(zhì)少、對待測樣品有良好的溶解度且又與水不相混溶。
常用的有乙醚、醋酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、苯或者兩種以上的混合溶劑。萃取后一般可直接進樣,有時需要濃縮或吹干濃縮,再用定體積的液體或流動相溶解進樣。這樣既增加了樣品濃度,又提高了靈敏度的同時避免了溶劑峰對樣品峰的干擾。在萃取是要考慮樣品分子的溶解能力。除了脂溶性和水溶性組分外,還有用脂溶性的組分制成水溶性的鹽,萃取方法如下:
水溶性樣品:
1、酸性組分及生成的鹽萃取方法:
有機溶劑萃取雜質(zhì)后調(diào)成酸性,再加有機溶劑萃取或進樣,或在N?流下吹干,用適當?shù)娜軇┙夂筮M樣。
2、堿性組分及生成的鹽萃取方法:
有機溶劑萃取雜質(zhì)后調(diào)成堿性,再加有機溶劑萃取或進樣,或在N?流下吹干,用適當?shù)娜軇┤芙夂筮M樣。
3、中性組分萃取方法:
①有機溶劑萃取雜質(zhì)后,直接用反相色譜法分析;
②脂溶性組分萃取方法:有機溶劑萃取或進樣,或在N?流下吹干,用適當?shù)娜軇┤芙夂筮M樣;
污染問題
一般檢測的環(huán)境、容器、試劑都是影響測定結果的因素。
1、環(huán)境污染儀器室的有害氣體、氣溶液、灰塵等等都能造成污染,影響檢測結果,這種污染很難校正。因此,儀器室與其他實驗室應隔離,保持清潔,儀器室內(nèi)應安裝空調(diào),注意:防潮、防腐、防震、空氣相對濕度應小于70%為宜。
2、容器實驗室常用的器皿有玻璃類、瓷類、石英類、塑料類等,在進行分析時,應按照待則樣品的要求來選則器皿,不管使用哪種器皿,容器的洗條清潔都是很重要的,也是取得好的檢測結果的基本保證。
3、試劑在液相色譜分析中,所選用的試劑必須是色譜純、優(yōu)級純或分析純,如果用含量有雜質(zhì)的試劑,則會出現(xiàn)雜峰而影響測定結果。
標準溶液的問題
在配置標準溶液時,先要配置現(xiàn)定濃度的內(nèi)標溶液,在標準溶液和樣品溶液中最好使用同一批次配制的內(nèi)標溶液以減少誤差。
1、配制標準溶液的物質(zhì)應當是色譜純的、性質(zhì)穩(wěn)定。
2、常用的標準溶液應存放在棕色溶液瓶中低溫保存。
3、在配制維生素類標準品時,要放置在棕色容量瓶中或避光放置以免分解。
其他問題
1、色譜圖中出現(xiàn)無關的峰,原因有可能是樣品過濾器帶來污染,解決方法如下:
(1)將過濾器浸泡在樣品溶劑中并進樣試驗;
(2)改變過濾器類型;
(3)采用交替清洗技術;
2、一些或全部化合物的峰比預期的小,尤其是低濃度的樣品,原因可能是樣品過濾器表面吸附下降,解決方法如下:
(1)改變過濾器類型;
(2)嚴格按相同條件處理所用樣品;
(3)采用交替清洗技術。
3、回收率太低或差,原因可能是萃取不完全,解決方法如下:
(1)增加萃取時間,使用熱溶劑;
(2)修改清洗方法;
4、色譜峰變寬,柱壽命縮短,原因可能是樣品帶來的干擾與污染,應改進清洗方法。
5、精度差,原因可能是回收不完全,解決方法如下:
(1)改進或替換衍生化、分離、萃取或其他條件;
(2)用自動化處理裝置提高精度;
小結
總之,對分析儀器來說,避免故障的最主要的做法是正確的操作和調(diào)節(jié),切忌盲目操作,減少各種系統(tǒng)誤差要注意以上要點,并且還要注意日常的儀器保養(yǎng),日常色譜柱的維護,儀器室保持清潔,這樣才能使液相色譜處于最佳工作狀態(tài),在分析中發(fā)揮其重要的作用。
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