影響Inertsil色譜柱壽命的主要因素有:流動性因素、樣品因素及其他因素。在使用色譜柱時,需關注這些因素,以延長其使用壽命。
一、流動相因素
1、流動相pH
不同類型的填料具有不同的pH值適用范圍。在室溫下,無定形硅膠在純水中的溶解度大約為100毫克/升,而在pH值在1至9范圍內(nèi),溶解的硅膠量基本上保持不變。鑒于溶解速度的影響,對于硅膠基質的填料來說,其能夠承受的流動相的pH范圍大約是1至8。
鍵合相硅膠填料由于鍵合層的屏蔽作用,使得填料對流動相的適應范圍大大增加,如目前廣泛應用的反相色譜填料C18(八十烷基硅烷鍵合硅膠),其pH適用范圍可達2~10。
流動相的pH值一旦偏離酸性范圍,鍵合相將容易發(fā)生水解和流失;而當pH值偏向堿性時,將加速硅膠溶解并釋放絮狀物,導致柱子堵塞。這兩種反應都是不可逆轉的,并且在高溫( > 40℃)下尤為明顯,會迅速降低柱的效率并使其報廢。
2、流動相變質
目前廣泛使用的是硅基鍵合填料,當流動相為水溶液或含有一定濃度磷酸鹽緩沖液時,會在水溶液或緩沖鹽溶液中繁殖細菌或霉菌,導致固定相顆粒間的空隙被堵塞。尤其是對于多元自動比例混合的高效液相色譜儀來說,若水相或緩沖鹽相長時間獨立保存,將更容易出現(xiàn)此問題。
3、流動相純度
當前常見的填料顆粒的尺寸范圍是3到10μm,孔徑在6到10nm之間。色譜柱在運行時會有大量的流動相通過,如果流動相中含有微量的不溶性雜質顆粒,容易在柱頭被滯留。隨著時間推移,這會導致色譜柱機械性堵塞,增加柱壓,使柱無法正常運行。
4、其它因素
流動相的極性會對柱子造成一定影響。例如,具有較大極性的甲醇、水和冰醋酸等物質可能會損壞硅膠填料柱;而正丁醇和二氯甲烷等極性較小的物質可能會破壞化學鍵結硅膠柱。另外,堿性溶液會損壞陽離子交換樹脂色譜柱,而酸性溶液則容易損壞陰離子交換樹脂柱。
二、樣品因素
1、樣品的溶解性
在樣品制備過程中,如果有一些微粒不能充分溶解,它們會隨著樣品一起進入色譜柱,最終會在柱頭處沉淀,導致色譜柱堵塞。
2、樣品的純度
樣品中可能存在待分析的化合物以外的其他各種成分或雜質,這些成分或雜質可能會在柱內(nèi)發(fā)生不可逆吸附,導致固定相的活性部位被遮蓋,從而影響其保留特性。
3、樣品的化學特性
在測試樣品中,各種成分和填料之間必須具有化學穩(wěn)定性。例如,使用氨基鍵合柱時,應該避免使用含有羰基的化合物和流動相,比如丙酮、乙酸乙酯等。這樣可以避免固定相中的NH2與酐和酮產(chǎn)生希夫縮合反應,從而破壞固定相。