液相色譜柱的儲存液若無特別說明，均為評價報告中所列的流動相。在使用之前，務必確認儲存液與待分析樣品的流動相是否能夠互溶。在反相色譜的操作中，如果使用高濃度的鹽或緩沖液作為洗脫劑，建議先用約10%的低濃度有機相洗脫劑進行過渡，否則緩沖液中的鹽分在高濃度有機相中可能會析出，導致色譜柱堵塞。

液相色譜柱的柱壓升高可能由以下幾種原因引起。

1、流動相的預處理

雜質(zhì)堵塞了色譜柱的進水濾片，導致壓力增加。這通常是因為流動相沒有經(jīng)過過濾，或者雖然經(jīng)過過濾，但過濾效果不佳，從而使固體雜質(zhì)滯留在濾板上。

2、樣品的沉淀

當溶解樣品的溶劑與流動相不一致時，樣品進入色譜柱時，可能因為溶解度下降而發(fā)生沉淀，導致壓力升高。

3、晶體的析出

在使用含有緩沖液的流動相時，緩沖液中的無機鹽可能會在系統(tǒng)內(nèi)殘留。這些無機鹽在新流動相中的溶解度降低，可能會析出，從而導致流體阻力增加和壓力升高。

4、細菌或霉菌滋生

霉菌會在流動相、管道或柱子入口處滋生，導致濾板被堵塞，從而使壓力升高。因此，使用磷酸鹽緩沖液時通常需要現(xiàn)配現(xiàn)用。

5、溶質(zhì)吸附

當溶質(zhì)在柱子上被強烈吸附，并且所使用的流動相難以將其洗脫時，累積的未洗脫溶質(zhì)會導致阻力增加和壓力升高。

6、流動相更換的頻率過高。

當流動相體系發(fā)生變化時，不同性質(zhì)、互不混溶的流動相可能會出現(xiàn)在同一體系中，這也可能導致壓力升高。

7、壓力脈沖

在運行過程中，系統(tǒng)內(nèi)的壓力有時會出現(xiàn)突然的波動。這種壓力脈沖可能會導致多孔填料的破損以及柱床結(jié)構(gòu)的細微變化。同時，填料微屑的長期積累也可能增加柱床的阻力，從而引起壓力的升高。