液相色譜柱的儲存液若無特別說明，一般為評價報告中所列的流動相。在使用前，務(wù)必確認(rèn)儲存液與待分析樣品的流動相是否能夠互溶。在反相色譜中，若使用高濃度的鹽或緩沖液作為洗脫劑，應(yīng)先用約10%的低濃度有機(jī)相洗脫劑進(jìn)行過渡，避免緩沖液中的鹽在高濃度有機(jī)相中析出，從而堵塞色譜柱。

液相色譜柱的幾種原因可能導(dǎo)致柱壓升高。

1、流動相的預(yù)處理

雜質(zhì)堵塞了色譜柱的入口濾片，導(dǎo)致壓力增加。這通常是因為流動相沒有經(jīng)過過濾，或盡管已經(jīng)進(jìn)行了過濾，但過濾效果不夠，導(dǎo)致固體雜質(zhì)滯留在濾板上。

2、樣品的沉淀

當(dāng)樣品的溶劑與流動相不匹配時，樣品進(jìn)入色譜柱后，有時會因為溶解度降低而出現(xiàn)沉淀，從而導(dǎo)致壓力升高。

3、晶體的析出

在使用含緩沖液的流動相時，緩沖液中的無機(jī)鹽可能會在體系中留下殘余。這些無機(jī)鹽由于在新流動相中的溶解度降低而會析出，從而導(dǎo)致流體阻力增加和壓力升高。

4、細(xì)菌或霉菌滋生

霉菌可能在流動相、管道或柱子入口處滋生并繁殖，進(jìn)而阻塞濾板，導(dǎo)致壓力升高。因此，使用磷酸鹽緩沖液時通常建議現(xiàn)配現(xiàn)用。

5、溶質(zhì)吸附

當(dāng)溶質(zhì)在柱子上被強(qiáng)烈吸附，并且所用的流動相難以將其洗脫時，未被洗脫的溶質(zhì)累積會導(dǎo)致阻力增加和壓力上升。

6、流動相更換的速度過于頻繁

在改變流動相體系時，不同性質(zhì)且互不混溶的流動相的替換，會導(dǎo)致它們共存于同一體系中，從而引起壓力升高。

7、壓力脈沖

在運行過程中，有時會出現(xiàn)系統(tǒng)內(nèi)壓力的突然波動。這種壓力脈沖可能導(dǎo)致多孔填料的破損和柱床結(jié)構(gòu)的細(xì)微變化，而填料微屑的長期積累也可能導(dǎo)致柱床阻力增加，從而使壓力上升。

針對上述導(dǎo)致液相色譜柱柱壓升高的原因，我們可以采取一系列預(yù)防與解決措施來確保色譜柱的正常運行和延長其使用壽命。

首先，加強(qiáng)流動相的預(yù)處理至關(guān)重要。應(yīng)確保所有流動相在使用前均經(jīng)過適當(dāng)過濾，推薦使用高質(zhì)量的濾膜，如0.45μm或更小的孔徑，以有效去除雜質(zhì)。同時，定期檢查并更換過濾器，防止因長期使用而降低過濾效率。

其次，針對樣品的沉淀問題，應(yīng)在進(jìn)樣前對樣品進(jìn)行預(yù)處理，如稀釋、調(diào)整溶劑或使用適當(dāng)?shù)臉悠非疤幚砑夹g(shù)，以確保樣品與流動相兼容，減少沉淀生成。此外，選擇合適的溶劑清洗色譜柱，以去除可能殘留的沉淀物。

對于晶體析出的情況，除了使用新鮮配制的緩沖液外，還可以考慮在流動相中加入適量的添加劑，如有機(jī)溶劑或表面活性劑，以提高無機(jī)鹽的溶解度，減少析出風(fēng)險。

在防止細(xì)菌或霉菌滋生方面，保持系統(tǒng)清潔干燥是關(guān)鍵。定期對色譜系統(tǒng)進(jìn)行清洗和消毒，使用無菌的流動相和容器，避免在長時間不使用時將流動相留在系統(tǒng)中。

針對溶質(zhì)吸附問題，可以嘗試優(yōu)化流動相組成，使用更強(qiáng)的洗脫劑或改變洗脫條件，以確保溶質(zhì)能被有效洗脫。此外，選擇合適的色譜柱和填料類型，根據(jù)分析物的性質(zhì)進(jìn)行匹配，也能減少吸附現(xiàn)象。

最后，在更換流動相時，應(yīng)緩慢過渡，避免直接切換，以減少不同流動相之間的相互作用和壓力波動。同時，定期檢查色譜系統(tǒng)的密封性和穩(wěn)定性，及時發(fā)現(xiàn)并解決潛在問題，如泄漏、堵塞等，確保系統(tǒng)穩(wěn)定運行。通過這些措施的綜合應(yīng)用，我們可以有效降低液相色譜柱柱壓升高的風(fēng)險，提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。