手性柱拆分的方法和注意事項.。手性色譜柱(Chiral HPLC Columns)是由具有光學(xué)活性的單體,固定在硅膠或其它聚合物上制成手性固定相(Chiral Stationary Phases)。
一、手性柱拆分的方法
1、一般有HPLC和SFC兩種方法,通過不同的體系搭配專用的手性色譜柱將目標(biāo)產(chǎn)物分離出來,這其中就涉及到手性化合物的方法開發(fā)。
2、對于一種手性化合物,開發(fā)一種新的拆分方法,會涉及到很多方面,選擇哪種體系(HPLC/SFC)?色譜柱?流動相?都要考慮進去。
3、就目前而言,SFC體系是拆分手性化合物的首選,其相對于HPLC體系而言有更好的選擇性和分離效果,同時也更高效,因為SFC體系采用的是超臨界流體CO2和有機試劑,搭配手性色譜柱,對手性化合物有很強的的選擇性和分離效果。
4、對于SFC體系,因為其采用的是超臨界CO2和有機試劑(改性劑)作為流動相,所以想要開發(fā)出合適的分離方法,其中要考慮到改性劑的選擇、手性色譜柱的選擇、溫度的控制、添加劑的選擇。
二、手性柱的注意事項
1、流動相中任何時候不能含有無機酸,無機堿,不可用不含銅離子的鹽,否則將損壞色譜柱。
2、流動相一定要采用預(yù)混合方式走等度,在線混合方式將損壞色譜柱。樣品一定要用水或流動相溶解。
3、流動相中硫酸銅的濃度發(fā)生變化時或體系發(fā)生變化時,色譜柱要重新平衡2小時以上。
4、避免在pH低于4.0或高于7.0的條件下使用色譜柱。
5、最高操作溫度為60°C。盡量在50°C以下使用。
手性色譜柱相對于其他C18等色譜柱而言,價格昂貴,但是其對手性化合物的分離有很強的選擇性,目前一般有兩種類型:涂敷型和鍵合型,其中的四大金剛柱可以將80%以上的手性化合物進行分離,剩余的可以用其他手性色譜柱進行嘗試。