液相色譜柱作為一種高精密儀器，如果在使用過程中不按照正確方式操作的話，就容易導致一些棘手的小問題。其中常見的就是柱壓問題、漂移問題、峰型異常問題，今天和大家一起分析一下液相色譜柱常見故障及解決方法。

　　【液相色譜柱系統(tǒng)】液相色譜柱主要由貯液瓶、泵、進樣器、柱子、柱溫箱、檢測器、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。對于整個系統(tǒng)而言，柱子、泵和檢測器是核心部件同時也是易出問題的主要部位。

　　常見問題及解決方法

　　一、柱壓問題

　　柱壓問題是使用液相色譜過程中需要密切注意的地方，柱壓的穩(wěn)定與色譜圖峰形的好壞、柱效、分離效果及保留時間等密切相關(guān)。所謂柱壓穩(wěn)定并不是指壓力值穩(wěn)定于一個恒定值而是指壓力波動范圍在345kPa以內(nèi)或在50PSI之間(在使用梯度洗脫時，柱壓平穩(wěn)緩慢的變化是允許的)。壓力過高、過低都屬于柱壓問題。

　　1壓力過高這是液相在使用中常見的問題，指的是壓力突然升高，

　　1、一般都是由于流路中有堵塞的原因。此時，我們應該分段進行檢查。

　　(1).首先斷開真空泵的入口處，此時PEEK管里充滿液體，使PEEK管低于溶劑瓶，看液體是否自由滴下，如果液體不滴或緩慢滴下，則是溶劑過濾頭堵塞。處理方法：用30%的硝酸浸泡半個小時，在用超純水沖洗干凈。如果液體自由滴下，溶劑過濾頭正常，在檢查；

　　(2).打開Purge閥，使流動相不經(jīng)過柱子，如果壓力沒有明顯下降，則是過濾白頭堵塞。處理方法：將過濾白頭取出，用10%的異丙醇超聲半個小時。如果壓力降至100PSI以下，過濾白頭正常，在檢查；

　　(3).把色譜柱出口端取下，如果壓力不下降，則是柱子堵塞。處理方法：如果是緩沖鹽堵塞，則用95%的水沖至壓力正常。如果是一些強保留的物質(zhì)導致堵塞，則要用比現(xiàn)在流動相更強的流動相沖至壓力正常。假如按上面的方法長時間沖洗壓力都不下降，則可考慮將柱子的進出口反過來接在儀器上，用流動相沖洗柱子。這時，如果柱壓仍不下降，只有換柱子入口篩板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以盡量少用。問題無法解決可考慮更換色譜柱。

　　2、流速設(shè)定不正確：可重新設(shè)定正確流量。

　　3、流動相配比不正確：不同配比的流動相其黏度系數(shù)不相同，較高黏度的流動相相應的系統(tǒng)壓力也大，如果可能可更換黏度較小的溶劑或重新設(shè)定配比。4、系統(tǒng)壓力零點漂移：調(diào)節(jié)壓力傳感器的零點。

　　2壓力過低

　　1、一般是由于系統(tǒng)泄漏，處理方法：尋找各個接口處，特別是色譜柱兩端的接口，把泄漏的地方旋緊即可。拆下柱子加適當力擰緊或襯四氟薄膜。

　　2、泵里進了空氣，但此時表現(xiàn)的往往是壓力不穩(wěn)，忽高忽低，更嚴重一點會導致泵無法吸上液體。處理方法：打開Purge閥，用3~5ml/min的流速沖洗，如果不行，則要用專用針筒在排空閥處借住外力將氣泡吸出。

　　3、無流動相流出：檢查儲液瓶中有無流動相，沉子是否浸在流動相中，泵是否運行。

　　4、參比閥未關(guān)閉：將流速降低后關(guān)閉參比閥。一般降至0.1～0.2mL/min后關(guān)閉參比閥。

　　基線問題

　　1基線漂移基線漂移是色譜工作者普遍遇到的問題,在實際工作中,我們經(jīng)常能遇到基線漂移的情況,特別是在梯度洗脫的時候,基線漂移是常有的事。一般說來，機器剛起動時，基線容易漂移，大概要30min的平衡時間，如果你用了緩沖溶液或緩沖鹽，還有就是在低波長下(220nm)平衡時間相對會比較長，但如果你在實驗過程中發(fā)現(xiàn)基線漂移，則你要考慮下面的原因：

　　1、柱溫波動控制好柱子和流動相的溫度，檢查是否有打開的窗戶或空調(diào)對著柱溫箱。

　　2、(即使是很小的溫度變化都會引起基線的波動。通常影響示差檢測器、電導檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器。)控制好柱子和流動相的溫度,在檢測器之前使用熱交換器。

　　3、流通池被污染或有氣體用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池(應該斷開柱子)。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)。

　　4、紫外燈能量不足更換新的紫外燈

　　5、流動相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成。檢查流動相的組成，使用高品質(zhì)的化學試劑及HPLC級的溶劑。

　　2基線噪音

　　對于紫外檢測器,氘燈光源打開后要預熱30 min以上,基線才能穩(wěn)定。噪聲是指與被測物無關(guān)的檢測器輸出信號的隨機擾動變化,分短期噪聲和長期噪聲兩種。

　　氘燈用的過久,接近壽命期時(氘燈的壽命約1 000 h),會使基線噪音明顯增加,應及時更換氘燈。除光源外,流路中的氣泡也會產(chǎn)生噪音。對于判斷基線噪聲增大是由于光源燈的老化還是來自流路中的氣泡的問題,可將泵關(guān)上,繼續(xù)走基線,如果噪聲立即停止,基線呈一條直線,說明基線噪聲來自流動相中的氣泡,應設(shè)法排氣；若停泵后仍有噪音出現(xiàn),應考慮是燈的問題。

　　基線噪音(規(guī)則的)

　　產(chǎn)生基線噪音的原因有：在流動相、檢測器或泵中有空氣；漏液；流動相混合不完全；溫度影響(柱溫過高,檢測器未加熱)；在同一條線上有其他電子設(shè)備；泵振動。

　　了避免基線噪音,在正式進樣之前,需要對流動相脫氣；沖洗系統(tǒng)以除去檢測器或泵中的空氣；檢查管路接頭是否松動；泵是否漏液；是否有鹽析出和不正常的噪音,如有必要,更換泵密封；用手搖動使溶劑混合均勻或使用低粘度的溶劑減少差異或加上熱交換器；有其他電子設(shè)備時斷開LC、檢測器和記錄儀,檢查干擾是否來自于外部,加以更正；泵振動時在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器。

　　基線噪音(不規(guī)則的)

　　(1)漏液：檢查接頭是否松動,泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要,更換密封,檢查流通池是否漏液。

　　(2)流動相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成：檢查流動相的組成。

　　(3)流動相各溶劑不相溶：選擇互溶的流動相。

　　(4)檢測器/記錄儀電子元件的問題：斷開檢測器和記錄儀的電源,檢查并更正。

　　(5)系統(tǒng)內(nèi)有氣泡：用強極性溶液清洗系統(tǒng)；檢測器內(nèi)有氣泡,清洗檢測器,在檢測器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器。

　　(6)流通池污染(即使是極少的污染物也會產(chǎn)生噪音):用硝酸清洗流通池；

　　(7)檢測器燈能量時不足更換燈；

　　(8)色譜柱填料流失或阻塞:更換色譜柱。

　　(9)流動相混合不均勻或混合器工作不正常:維修或更換混合器,在流動相不走梯度時,不建議使用泵的混合裝置。